Способ выделения сложных эфиров -защищенных аминокислот из их водных растворов

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ГЗАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 5-7-.8„(1Я, 1

«ф» (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено31.07.74 (21) 2051820/04 (23) Приоритет - (32) 01.08.73 (31) 36498/7 3 (33) Великобритания (43) Опубликовано30.10.77.Бюллетень № 40 (45) Дата опубликования описания 10.12.7 (Я),Ц, 1 .л, (, (>, с- т с>! / (Z

Государственно>й коинтет

Совета Мнниотров СССР по делом мэооретеннй и открытий (53) УДК с !7. !"". (r>s>, т ) Инос транцы

Копии Робинсон и Дэрек Вопкер (Вепикобритания) (72) Авторы изобретения

I1ностранная фирма

"Гпаксо Лабораторно Лимитед" (Великобритания) (71) Заявитель (54) С! I(X Оl > ВI>1Д!.Л! .I! I Iß СЛОЖ11f>lih ЗФ111 OI5

Ы вЂ” 3А!!!!!!!!Е1!!!!)!Х АМ!1!1ОК!!СЛОТ 113 !!Х ВОД!!1)1Х

РАС 1 Рс н (1В при этом эф>ир от)ионического собо и.

В качестве динения общей

К

К где f< -водород ипи органическая группа;

Ь -о!и >1>,ич>оскоя группо;

1(> lt 1(в >Осто с ого..>ох(углерода обраг зуют цикпическу> of)t оническую группу, предночтитопьио диф(ошгпдиазотзетан.

N — зашише »ые аминокис:>с>гь>, которые подвергоют экст!>агироьч)иию, .".>Огут быть нредстовпош,i фор (у пой С!СОО11, где Q является орго>>и чеoko>> Гру)нтс)11 ° содеf>)t(()ttt(. Й иат>!»>:.>ер, 1-. >0 () t ol,>()B уt (>о!>Ода и llo крайней м е Одну ()сс)»и>ц()>и(у)с) (1.">и»огт ун>1у, и . >О)>("i бы! l, l(>l>i>-, till- ип» ни»>ко!>бо)(ои(>й

K > i C: J l i т о l > ..!!зобретение относится к усовершенствованному способу выделения спожнь(х эфиров !! -зашишенных аминокиспот из их водных растворов, в частности из ферментационных бульонов. 5

В литературе описан способ выделения производных пенициплановой киспоты из водного раствора в вице калиевой соли с помощью 2-этипгексаноата капия (13

Однако в процессе rlo такому способу zo необходимо проводить бь)струю экстракцию и поспедуюшую длительную очистку получоюшейся соли, бопее стабильной, чем свободная кислота.

С цепью усовершенствования процесса по предлагаемому способу М -защищенные аМИНОКИСПОт61 ИЗ ИХ ВОДНЫХ РаСТВ(i))()l B> t ДС пяют эте1)ификацией диазоапконом с- on(tot>I)менной экстракцией Органическим растворитепем. )0

По предлагаемому способу (-защищенную аминокиспоту в виде водного раствора подвергают взаимодействию с диазоопкано..l в присутствии органического раствори ге ст я, не смешиваюШегося с водой, Образующийся Z5 ().,>Ниокислот>н выдс.>пян)т из

Z>()стиорите>и изи()(т ны ((.ttoди«зоапконов исиоиьзунт сс)(с!>ОРМУ>П,l:

578863 бО

Когда применяют диазоалкаи формулы Г,, получаемый эфир соответствует формуле

ЯСООСНЕ Я, где Ы и Р имеют указанные значения.

Примерами И -защищенных аминокислот, 5 которые могут быть подвергнуты экстрактивной этерификации по предлагаемому способу, являются N -защищенные производные простых аминокислот: аминоуксусной кислоты, цистеипа, метионина, аспарагиновой кисло- 10 ты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, триптофана и L — ДОПА, M -защищенные пептиды, в частности, из ферментационных жидкостей, растительных и животных экстрактов и сложгпгх водных реакционных сме- 15 сел, получаемых при синтезах пептидов, например глутагиона, и натуральный или гголусинтетический пенициллин и пефалоспорин и соответствующие продукты разложения, например пенициллиновая кислота или пени- 20 циллановая кислота, в частности, из ферментационных и другиж процсессов, каталпзируемых э из им ом.

Водные растворы N защишенных амино кислот, которые поцвергают экстрактивной этерификации, могут содержать небольшие количества (например, до 20 об,%/об.) одного или более сорастворителей, например водорастворимых органических растворителей, таких как низшие алканолы (например, метанол), кетоны (например, ацетон), сложные иры (например, этилацетат), N,N -дизамещенные амиды (например, диметилацетамид) и эфиры (напрпмер, циклические эфиры, такие как диоксан), наприк ер, для того, чтобы придагь растворимость М -защищенным аминокислота «B Bort o cpelle. С другой стороны, в случаях, когдаЯ -защищенные аминокислоты проявляют особенно, низкую растворнмосгь в воде, водный раствор ожет 40 принять форму шлама, включающего насьпленный водный раствор М -защищенных аминокислот в контакте и равновесии с твердой, нераст воримой М -затцищенной аминокислотой.

Примерами пенициллинов и цефалоспори- 45 нов, которые подвергают экстрактивной этерификации по предлагаемому способу являются соединения, имеюп ие структурную формулу где Z-,5 или 5О;

Х является двухвалентной группой, выбранной из где Y является метилом, замешенным метиI лом, например СН У, rue g является остатком нуклеофила, включающим такие группы, как ацетокси-, окси- или карбамоилокси, или ненасыщенной группой такой, как винил или замещенный винил, и пунктирная линия между 2-, 2- и 4-положениями в формуле tV указывает на то, что соединение может быть цеф-2-ем нли цеф-3-ем соединением; является защищенной аминогруппой, например карбоксильной ациламидогруппой (например, содержащей 1-20 атомов углерода) или протонированной аминогруппой (М Н ), Ы является водородом или низшей (например, С - Q) алкильной, алкокси» или алкилтиогруппой, например метоксигруппой.

В соединении Й К является карбоксильной ациламидогруппой, ацильная часть которой может быть выбрана из ацильных групп пенициллина и цефалоспорина, описанных в литературе, Структурная формула Й включает в себя также соединения, не охваченные специально группами ф и iÐV/, например 2-ацетоксиметипт|егц1циллитгы и 2-метил- и 2-метиленцефалослорин.—

Когда экстрактивной этерификации подвергают кислоту, содержащую одну или несколько свободных аминогрупп, например простую аминокислоту или пенициллиновую,или цефалоспориновую кислоту, содержащую аминогруппу в 6- или 7-положении боковой цепи, такие группы защищают перед этерификацией протонированием или введением защитной группы.

В качестве водонерастворимого растворителя, применяемого при проведении экстрактивной этерификации, применяют инертный к реакционным условиям и обладающий спо578863 собностью частично растворять этерифициро» ванную N -защищенную аминокислоту.

Применяют предпочительно хлорированные углеводороды, например метиленхлорид, хлороформ или хлорбензол; алифатические и ароматические эфиры, например этилацетат, бутипацетат или этилбензовт; водонерастворимые кетоны, например метилэтилкетон или метипизобутилкетон; алифатические или ароматические углеводороды, например бензол, 10 или спирты, например водонерастворимые низшие апканолы, такие как g-бутанол, а также смеси указанных растворителей.

Экстрактивную этерификвцию проводят, прибавляя раствор дивзоалквна в выбранном 15 органическом растворителе к водному раствору М -защищенной аминокислоты.

Эксграктивную зтерификациюМ -защищенных аминокислот проводят, предпочтительно, в присутствии одной или нескольких сильных 20 кислот, имеющих рКа меньше, чем рКа

К -защиьченной аминокислоты, например минеральной кислоты, такой квк серная кислота, ортофосфорная кислота.

Экстрактивную зтерификацию в некоторых случаях проводят в присутствии кислот более слабых, чем М -защищенная аминокислота. Гак, например,,пенициллин g и т — защищенный цефапоспорин С могут быть селективно подвергнуты зкстрактной этерификации в присутствии более слабых кислот, феноксиуксусной и уксусной соответственно.

Порядок добавления диазоалкана, органического растворителя и кислоты к водной

К-защищенной аминокислоте зависит от природы аминокислоты.

Водные растворы кислоточувствительных

И -защищенных аминокислот можно стабилизировать до начала экстрактивной этери« фиквции, сохраняя рН, при котором разложе

40 ния И -защищенной аминокислоты не проис« ходит, например при р1-!Ъ7. Понижение рН при подкислении раствора после добавления диазоалканв и органического растворения

45 дает возможность быстро осуществить этерификациюМ-защищенной аминокислоты диазоалканом.

Количество диазоалквна, требуемое для проведения реакции, находится в пределах

1,0-1,5 моль на эквивалент кислоты. Так, например, при зкстракции двухосновной цефалоспориновой кислоты используют 2-3 моль диазоалкана, например, около 2,1 моль на

1 моль двухосновной кислоты.

Процесс экстрвктивной зтерифихации по предлагаемому способу осуществляют при о температуре от -50 до +100 С, предпочо тительно при 0-50 С, например при комнат ной температуре.!!елевые продукты выделяют известным способом.

Пример 1. Бисдифенялметиловый эфир (6 Ц, 7 R ) -7-(R -5-бензоиламино-5-кврбоксипентанамидо-3-оксиметипцеф-3«ем-4- кврбоновой кислоты.

К раствору (6 R, 7 К )-7-(R -5-вмино-5-кврбоксипен тана мHBQ)-3-оксиметилцеф-3-ен-4-карбоксплата калия 70; vol чистоты (6,0 г, 10 ммоль) в воде (150 мл) добавляют смесь бензоилхпорида (3,5 г, 30 ммопь) и ацетона {5 мл). Смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, причем рН 8,5 поддерживают добавлением 50".: ного фосфата калия. Устанавливают рН 5,0 при помощи ортофосфо!ной кислоты и раствор экстрагируют хлороформом (100 мл) для удаления бензойной кислоты и бензоилхлорида. К водному раствору добавляют зтипацетат (90 мл), содержащий дифенилдиазометан (5 r, 26 ммоль). дихлорметан (50 мл) и зтанол (10 мл), и смесь перемешиваюг в течение 45 мин, B течение которых р!! доводят до 2,0 при помощи ортофосфорной кислоты.

После отделения слоя растворителя его промывают 5%ным раствором бикврбонатв натрия (100 мл) и водой (100 мл}. Растворигепь удаляют в вакууме и смолу растворяют и изопропаноп (25 мл) при 30 С.

Лобеепяиот 10 пл петролейиото ефирп т.иип.

Ь

30 40 C) и раствор охлаждают до -5 С.

Продукт промывают петролейным эфиром (15 мп) и сушат в вакууме при комнатной температуре.

Выход продукта 10,5 г.

Пример 2, Йифенилметил-(ÇS, 5 >

6 P )-2,2-диметил-б-феноксиацетамидопьнам-З-карбоксилат-1-оксид, К раствору (3S, 5 R, 6 R )-2,2-диметил-6-феноксиацетамидопенам-3-карбоксилата калия (7,8 r, 20.смоль) в воде (100 мл) добавляют раствор дифенилдиазометана {4 r, 20 ммоль) в дихлорметане (75 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин при 10"С, в течение которых рН доводят до 3,5, добавляя ортофосфорную кислоту. Смесь отделяют и слой растворителя промывают водой (1

100 мл), 5%-ным раствором бикарбоната натрия {100 мл ) и водой (100 мл). Йс бавляют надуксусную кислоту (18,5 мл, 37 вес о/об) к растворителю в течение о

15 мин при 10 С с дальнейшим перемешиввнием и течение ЗО мин. Растворитель промывают водой (100 мл), 5О -ным раствором бикарбоната натрия {100 мл) и опять водой (100 мл), затем удаляют его в вакууме и продукт криствллизуют из горячего изспро-! панола (9,1 г).

578863

Пример Ы. ьисдифенилметилэвый эфир (64, 7Х)-7-ф-5-карбэкси-5-(2,2,2-трихпэртэксикарбэнипаминэ)-пентанамидэ-!

-3-карбамоипоксиметип-7-метоксицеф-3i-ем-4-карбоновой кислоты.

7 ,цанпьге ИК- и Я!1Р-спектров подверЖдают структуру целевого соединения.

Пример. 3. Биодифенилметиловый эфир (6 R, 7 h )-3-алетоксиметигг-7-(Й -5-бензоилампно-5-карбоксипентанами- 5 до)-цеф-3-ем-4-карбоновой кислоты.

К раствору (6 Р, 7 Р )-3-ацетоксиме = тип-7-(g -5-бензоиламино-5-карбоксипентанамидо)-цеф-3-ем-4-карбоновой кислоты (4,8 г, 10 ммоль) в воде (100 мл) добаь- 10 пяют раствор дифенилдиазометана (4 г, 20 ммоль) в дихлорметане (75 мп), этилацетат (25 мп) и этанол (10 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мип при комнатной температуре и устанавливают рН 2,0 15 при помоши оргофосфорной кислоты. После отделения расгворителя его промывают 5% ным раствором бикарбоната натрия (100 мл). и водой (100 мл). После высушивания раст воритепь удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петролейным эфиром (40-60 С) о и выдепяют целевой продукт,, П р и м е о 4. Бисдифенипметиловый

/ Ъ эфир (6 P 7 ? )-Я 5каРбокси-5»изобУтилэксикарбэнил (аминэпентанамидэ)-3-окси-25 ме гилцеф-3-ем-4 карбоновой кислоты.

Изобутилхпорформат (50 мл, 375 ммопь) добавляют в течение 1 ч к раствору (6 и

7 R )-7-(Я -5-амино-5-карбоксипентанамидо-3-оксиметцлцеф-3-ем-4-карбоксилата ка- > лия (34,4 г 60 ммоль) в воде (350 мл) при рН 7,8-8,0 и 5 С. Смесь перемешивают в течение 30 мин, поддерживая температуо ру 5 С и рН 7,8-8,0. Раствор экстрагируют хлороформом (250 мл) при рН 5,0 и добав- M ляют к водному раствору раствоу дифенилдиазометана (25 г, 126 ммопь) в дихлорметане (250 мп), этилацетат (100 мп) и этаноп (30 мп).

Смесь перемешивают в течение 30 мин о при 15 С, устанавливают рН 2,0 при помон,и ортофосфорной кислоты. После отделения растворитепь промывают 5%-ным раствором бикарбоната натрия (2х100 мл) и водой (100 мл). После высушивания растворитепь

45 удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петропейным эфиром (40-60 С) и выделяют о целевой продукт (45,5 г).

Пример 5, Дифенипметил (6Я

7 Я )-3-оксиметип-7-(тиен-2-ипацетамидо)-цеф-З-ем-4-карбоксилат. . К раствору {6 В, 7 Ц)-3-7-(тиен-2-илацетамидо)-цеф-3-ем-4-карбоксилата калия (4,0 г, 10 ммопь) в воде (100 мл) добавляют раствор дифенппдиазометана (2,0 г 55

100 ммоль) и дихпорметане (75 мл) и этаноле (100 мл). Смесь перемешивают в течение 25 мин, в это время р?! доводят дэ 2,0 прп помоши ортофосфэрной хнслоты. (60

Г!оспе отделения растворптель промывают водой (100 мп), 5% ным раствором бикарбс ната натрия (2х100) и водой (100 мл).

После вьгс -шивания растворитель удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петролейным эфиром (40-60 С) и выделяют целевой продукт (5,15 г).

Пример 6, Бисдифенилметиловый эфир {6К., 7Я )-3-ацетоксиметил-7-(4-карбоксибутанамид)-цеф-3-е м-4-карбон овой кислоты.

К шламу (6 R, 7 R )-3-ацетоксиметил-7-(4-карбоксибутанамидо)-цеф-Э-ем-4-карбоновой киопоты (0,24 r, 0,575 ммоль) добавляют. дифеыилдиазометан (0,3 r

1,5 ммоль) в дихлорметане, (15 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин, в это время рН доводят до 2,0 при помоши ортофосфорной кислоты. Смесь затем перемешивают в течение еще 75 мин при комнатной температуре. После отделения растворитель промывают 5% ным раствором бикарбоната натрия (2х25 мл) и водой!(25 мп). После высушивания растворитель удаляют в вакууме, остаток обрабатывают петролейным эфио ром (40-60 С) и выделяют целевой продукт (0,38 r).

Г! р и м е р 7..Бисдифенилметиловый эфир (6й, 7й )-7-fR-5-карбокси-5-(3,5-диэ токсикарбонил-2, 6-диме тип-1,4-диги дропиридин-1-и+пентанамидс)-3-оксиметипцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты.

К раствору (6R, 7К )-7-(К -5-амино-5-карбэхсипентанамидэ) — 3 — эксиметипцеф—

-3-ем -4-харбэксилата калия 70%-нэй чистоты (12 г, 249 ммэль) добавляют

37%-ный раствэр фэрмапьдегида (18,7 мл, 249 ммопь) и этипацетат (25,2 мл, 199 ммопь) отдельно в течение 1 ч при о

5 С.рН раствора поддерживают 7,0 добавляя 257 -ный раствор фосфата калия. После перемешивания в течение 30 мин, раствор экстрагируют дихлорметаном (200 мп).

Йихлорметагг (150 мл) содержащий дифенипдиазометан (10 r, 52 ммопь) добавляют к водному раствору и смесь перемешивают в течение 45 мин, в это время рН доводят до

2,0 ортофосфорной кислотой. После отделения слой растворителя промывают водой (200 мл) ° 5%ным раствором бикарбоната натрия (200 мп) и водой (200 мл). После высушивания над сульфатом магния раствор концентрируют в вакууме до объема, равного

75 мп, с получением раствора целевого соединения.

578863

Процесс 11роводят по примеру 9, за исклкэченпем того, что вместо раствора дифенилдиазометане B днхлорметане использукт раствор нафт1чфенилдназометана (примерно

44 ммоль) в дггхлорг.1етане (150 мл).

Выход целевого продукта 23,3 r.

Пример 11. Бис- (и -метоксифенило-фенплметиловый эфир (6гх, 7Ц )-7-(R-5-кербокси-5- (2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)- пентенамидо1 -3-оксиметил.1 цеф-3-ем-4-карбоновой кис:,оты.

Процесс проводят по примеру 9 зе исклк чение;i того, что вместо растворе дифенилдиазометена в дихлорметане используют раствор 1ч -метоксифенил -(фегп1лдиазометена) (прил:ерно 44 ммоль в дихлорметане (1 50 .".in).

Выход целевого продукта 6,4 г.

П р и;i е р 12, Qiiôåíïnìåòèn (6Г, 7R)-3-е це токс им е 1 н,1-7- (тиен-2- иле це та ми до )-цеф-З-ем-4-кербоксплат.

К раствору (6К, 7Я )-3-ацетоксил1етил-7-{тнен-2*-планета мндо)-цеф-3-ем-4-кербокснлета натрия (4,2 r, 10 ммоль} в воде (50 мл) добавляют дихлорметен (30 мл), содержащпй дифенилдиазометен (2, 1 г, 11 ммоль) рН раствора доводят до 3,0 в течение 15 мнн, используя 10". ный растВ0р серной кислоты. Смесь разделяют и органическую фазу проль веют водой (4 х

К50 мл). Раст -.оритель уделяют в вакууме.

Выход целевого продукта 6,96 г.

П р и «е р 13. Бисдифенилметпловый эфир М -(2,2,2. =.рихлэрэтэксикербэнилj

-глутаминовой кислоты.

2,2,2-Трихлорэтилхлорформат (5,5 мл, 40 «моль) и добавляют к раствору )1 -глутаминовой кислоть: (3,38 г, 20 ммоль) в воде (100 мл), .рН раствора поддерживают

7,5-8,0 в течени-.. 30 л ин, используя

10%пег и раствор гидроокиси натрия. Раствор экстрагируют дихлорметаном (2 х 100 мл) при рН, равном 5,0. Раствор дифенилдиазометана (85 г, 44. ммоль) в дихлорметане (140 мл) добавляют к водной фазе и рН

1 доводят дэ Beличины, равной 2,0, испо11ьзуя

10%ны",!.раствор серной кислоты, в течение

1-> л -нн- После отделения растворитель промы веют во дой (3 xl 5 0 ли1), Рас твори тель уделяют в вакууме.

БЬ1хэд продукте 14,3 r.

Пример 14-. М -Бензилоксикарбонилглицинбисдифени11метигlОВый эфир.

Раствор дифенипдиазометана (2, 1 г, 11 ммоль) в дихлорметaнe (32 мл) добав лчют к раствору И -бензилоксикарбоггилглицине (2,1 г, 10 ммоль) в воде {50 мл), рН доводят до 3,5 используя 10".о-ную серную кислоту в течение 15 л1иг1. После

Отделе иия раствори тель промывают водой .(3х50 мл), .затем уда яют в вакууме. Прозо

2,2,2-Трихлорэтилхлорформат {3 мл) добавляют в течение 1 ч к перемешиваемому раствору моноаммонигйной соли (6H, 79.) .7- R -5-амино-5-карбоксипентанемидо)-2-ка рба моилокс и ме т ил-7-ме токси цеф-3-е м-4-карбоновой кислоты (4 r в 80 мл воды), содержагцей бикарбонат натрия (6 r) при о

10 С, рН поддерживают 7,8-8, добавляя, о едкий натр. Смесь перемешивают при 10 С и рН 7,8-8 в течение 90 мин. рН доводят до 5 при помоши ортофосфорной кислоты и раствор промывают хлороформом (2Ii,100 мл), к водной фазе добавляют этилацетат (50 мл), этанол (10 мл) и раствор дифегпглдиазометана в л1етиленхлориде (50 мл, примерно

0,2 ммоль). Смесь перемешивают при 15 С в течение 30 мин, в это время рН доводят до 2 ортофосфорной кислотой. После отделения органический слой промывают 5",гным вэдныгл раствэрэм бикарбэната натрия (2х80 мл) и водой (100 мл), сушат

Ма О ) и выпаривают .с получением

I сколы (2,8 г). Очишеют при помоши хроматографии на колонке (силикагель; хлороформ и этилацетат) с послодуюшей тонкослойной хроматографией {силикагель; хлороформ и метанол) и получают целевой продукт в виде белой пены (410 мг).

Данные ИК, SIMP-, УФ-спектров микроанализов подтвердили, что структура полученного соединения соответствует структуре целевого еоединения.

Пример 9, Бисдифенилметиловый эфир (6g, 7К )-7-(Ц -5-окси-5-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-пентанамидо1—

З5

-3-оксиметилцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты.

2,2,2-Трихлорэтилхлороформат {5 мл, 37 ммоль) добавляют к раствору {6p, 7 )

4О

-7-(Г -5-амино-5-кербоксипентанемидо J-3-Оксиметилцеф-3-ен-4-карбоксплата калия(20 ммоль) в воде (100 мл), рН раствора поддерживают 7 5-8,9 в течение

30 мин. используя 10 /-ный раствор гидро45 оксида натрия. Раствор затем экстрагируют дихлорметанол (50 мл) при рН 5,0.. Раствор дифенилазометана (8,5 г 44 ммоль) в дихлорметане (150 мл} добавляют в водной фазе и рН доводят до 3,5 используя о

10.ную серную кислоту, После отделения растворитель промывают водой (Зк150 мл), Растворитель удаляют в вакууме и выделяют целевой продукт (20,5 г).

Данные ИК- и ЛИР-спектров подтверд11

55 ли, что структура полученного соединения соответствует структуре целевого соединения.

Пример 10, Биснафтилфенилметиловый эфир (6Я, 7q )-7-Я -5-окси-5 (2,2,2—

-трихлорэтоксикербогги11ам11но)-пентенамид 1— оО

-3-оксиметилцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты. дукт осаждают, добавляя избыток эфира.

Осадок фильтруют и промывают эфиром (15 мл).

Выход продукта 3,4 г.

Пример 15.М (2,2,2-трихпорэток 5 сикарбонип)- гпутатионбисдифенилметиловый пр.

Процесс проводят по примеру9, за иск почением того, что вместо (6Ц, 7й )-7-(Я -5-амино-5-карбоксиментанамидо-3- ок- 10 сик1етипцеф-3-ек 4-карбоксипата калия обрабатывают глутатиан (6,14 г, 20 ммопь).

Выход продукта 11,3 r.

Пример 16.9t. -метиониндифенипметиловый эфир, соль И -топуопсупьфокиспоты. 1Б

0f -метионин (3,0 г,20 ммоль) и моногидрат и -топуопсульфокиспоты .(3,8 г, 20 ллмэпь) растворяют в воде (50 мл) при комнатной температуре. Добавляют дикпорметан (50 мп), содержащий дифенилдиазо- 0 метан (4„85 г,25 ммопь) и смесь перемв шивают в течение 1 ч при рИ 2. Иоспе отделения органический спой промывают 5%-ным раствором бикарбоната натрия (50 мп) и водой (50 . M) Растворитепь удаляют в вакууме и продукт кристалпизуют из ацетона, отфильтровывают и промывают ацетонитрилом {15 мп).

Выход продукта 5,4 г.

Точка плавления и данные ИК и ЯМР(2 100 мл) и водой (100 мл). После сушки растворитедь удаляют в вакууме, остаток о обрабатывают петропейным эфиром (40-60 C).

Получают 16,9 г целевого продукта.

Пример 18. Бис-1-фенипэтиповый эфир (6Ц, 7R )-7-(R -5-карбокси-5)-.2,2,2-трихпорэтоксикарбониламино-(пентанамидо)-3- -оксиметил-цеф-3-ем-4-карбоновой кислоты.

Процесс проводят по примеру 9, за исключением того, что вместо раствора дифенипдиазометана в дихпорметане используют раствор 1-фенилдиазоэтана (примерно

44 ммоль) в дихпорметане (150 мл).

Получают 18,6 г целевого продукта.

Пример 19. Лифенилметип (5Ê, 6 К )-2,2-диметил-б-феноксиацетамидопенам-3-карбокс ипат.

К раствору {5g, 6Я )-2,2-днметип-6феноксицетамидопенам-3- карбоксипата калия (10 г, 25,7 ммоль) и феноксиуксусной кислоты (2 г, 13 1 ммоль) в воде

{100 мл) добавляют раствор дифенилдиазометана {5,2 г, 27 ммоль) в дихпорметане

{100 мл). рН доводят до 4,0 и смесь п<ъремешивают в течение 10 мин. После отдепения органический слой промывают водой

{100 мл),5%ным раствором бикарбоната натрия (100 мп) и водой (100 мп).

Растворитепь удаляют в вакууме и получают 11,4 г целевого продукта, спектров подтвердили, что структура попу ченного соединения соответствует структуре целевого соешп ения.

Пример 17. Бисфенип-(О -топил)-метиловый эфир (6 R, 7 К )-7-(Ц -5-изобутипоксикарбониламино-5-каробксипент анамидо)-3-окснметндцеф-3-ем-4-карбоновой кислоты.

К раствору (6К, 7 )-7-Р -5-амино-5-карбокс ипен тана миде-3-оксиметнлцеф-3-ем-4-карбоксипата калия 67,1%ной частоты (11,2 г, 20 ммопь) в воде (100 мп) добавляют изобутипхпорформиат (16 мп, 120 ммопь) в течение 1 z прн о

10 С и рН 7,8-8,0. Смесь перемешивают в течение 30 мин, поддерживая pff 7,8-8,0.

Затем рН доводят до 5,0 ортсфосфорной киспотой и экстрагируют хпорсформом (2 к100 мл). Раствор {Q -топил)-фепилдиа зометана (4,2 г,40 ммопь) B смеси дихлорметана (120 мп), этипацетата (60 мд) и этаиопа (20 мп) добавляют к водному раствору. Смесь перемешивают в течение

-15 мин, во время чего рН доводят до " ортофосфорной кислотой. После отделения растворитепь промывают водой (100 мп), 5";-шпм раствором бикарбоната натрия

46

Формула изобретения

1. Способ выделения сложных эфиров

М-зашишенных аминокислот из их водных растворов, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью усовершенствования процесса, к водному раствору аминокислоты добавляют раствор диазоалкана в органическом растворителе, не смешиваюшемся с водой, и образующийся эфир К -зашишенной аминокислоты выделяют из органической фазы известным ! способом.

2 ° Способ по п. 1, о т и и ч а ю ш и йс я тем, что дназоапкан является диазоарапканом, включающим ., низшую алкильную группу, несушую один ипи два арипьпых остатка, замешенных карбоксильной ипн гетероцикппческой группой в положении 1.

3. Способ по и. 2, о т и и ч а ю ш и йс я тем, что диазоарапкан является дифенипдиазометаном. источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1„Патент CfllA ЛЪ 3248386, кп, 260-233,1, опубп. 26.04.66.