Способ получения 2-галоген-никэрголинов

 

Изобретение касается замещенных гетероциклических веществ, в частности получения 10о -метокси-2-хлор (или бром)-1,6-диметил-эрголин-8|5- метанол-5-бромникотинатов - продуктов для производства сложных эфиров 5-бромникотиновой кислоты . Цель - упрощение процесса и расширение ассортимента веществ указанного класса. Их синтез ведут в присутствии пиридина из 1-метил-2-бром (или хлор)-люмилизергола и активированного сложного эфира 5-бромникотиновой кислоты, который получают при комнатной температуре из N-оксисукцинимйда и 5-бромникотиновой кислоты. Новые 2-хлор (или бром)-никэрголины обладают антигипоксической активностью при дозе 2,5 - 10 мг/кг в сравнении с контролем до 150%, а также влияют на способность к обучению при дозе 5 мг/кг (131-182%). Кроме того, новые вещества оказывают связывающее с el -1- и -2-рецепторамн и синаптосомальное действие в 13 раз выше, чем у никэрголина. Указанные условия синтеза обеспечивают лучший (до 95%) . выход без образования побочных продуктов и структурных изомеров. 2 табл. О) с 4 4 сл ел сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5в 4 С 0" D 457/O2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К 0ATEHTV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4027691/23-04 (22) 20. 06. 86 (31) 2447/85 (32) 21. 06. 85 (33) HU (46) 15.12.88. Бюл. 9 46 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр, PT (HU) (72) Габор Иедьери, Тибор Кеве, Бела Ытефко, Эрик Богш, Янош Галамбош, Анна Кашшаи, Ференц Тришлер, Ева Палоши, Дора Гроо, Эгон Карпати, Жолт Самбательи, Ласло Спорни, Бела Кишш, Иштван Ласловски и Эржебет Лапиш (HU) (53) 547.945.1.07(088.8) (56) Патент СЫА Ф 3228943, кл. 260-285.5, 1965.

Bernardi L., Bosisio G; et al.

Ег8оЫпе Derivatives. Farmaco-Ed.

Sc. 30(10) 789-801, 1975. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-ГАЛОГЕННИКЭРГОЛИНОВ (57) Изобретение касается замещенных гетероциклических веществ, в част„„SU ÄÄ 1445557 нос ти получения 10<-метокси-2-хлор (или бром)-1,6-диметил-эрголин-8 метанол-5-бромникотинатов — полупродуктов для производства сложных эфиров 5-бромникотиновой кислоты

Цель — упрощение процесса и расширение ассортимента веществ указанного класса. Их синтез ведут в присутствии пиридина из 1-метил-2-бром (или хлор)-люмилизергола и активированного сложного эфира 5-бромникотиновой кислоты, который получают при комнатной температуре из N- îêñèñóêöèнимида и 5-бромникотиновой кислоты.

Новые 2-хлор (или бром)-никэрголины обладают антигипоксической активно- 3 стью при дозе 2,5 — 10 мг/кг в сравнении с контролем до 150Х, а также влияют на способность к обучению при дозе 5 мг/кг (131-182K). Кроме того, новые вещества оказывают связывающее с Ы . -1- и а -2-рецепторами и синапто1сомальное действие в 13 раз выше, чем у никэрголина. Указанные условия Дйь синтеза обеспечивают лучший (до 95%) >фью выход без образования побочных про- фГ дуктов и структурных изомеров. 2 табл.

1445557

Изобретение относится к улучшенному способу получения отчасти известных 2-галоген-никэрголинов общей формулы 5

СНг-Π— С O

10 сн он

Сн — N X где Х вЂ” хлор, бром кислот, 30 превращают в сложные эфиры 5-бромникотиновой кислоты.

Цель изобретения — создание упрошенного процесса получения 2-галоген-никэрголинов с расширенным ас35 сортиментом целевых продуктов.

Пример 1. 2-Хлор-люмилизергол.

2,0 г (0,007 моль)2-хлор-лизергола растворяют в 200 мл приготовлен- 40 ной в соотношении 40:75 смеси метанола с серной кислотой. Реакционную смесь облучают при 25-30 С с помощью ртутной лампы (TUNGSRAM, 250W). 3а реакцией следят с помощью тонкослойной хроматографии (силикагель 60 P хлороформ и метанол 80:20). По окончании реакции раствор осветляют с помощью 0,2 r активного угля, отфильтровывают, выливают в 300 мл ледяной

50 воды и устанавливают рН = 8 с помощь.с аммиака. Смесь трижды экстрагируют по 70 мл хлороформом. Объединенные . органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме. Остаток после выпаривания перекристаллизуют из ацетона. Получают 2,0 г (903) названного соединения с т.пл. 227 С.

СН вЂ” N X

15 где Х вЂ” хлор, бром, а именно 10  -weтокси-2-галоген-1,6-диметил-эрголин8 -метанол-5-бромникотинатах, Соединения получают тем, что но, вые 1-метил-2-галогенлюмилиэерголы . . з . 20 (10Ы;метокси-.2-галоген-1,6-диметилэрголин-8 -метанолы) общей формулы

Н-ЯМР(1)МСОс1 + CDC1 ), м.д.: 2,50 (дублет ЗН, N-CE1 ); 2,85 (дублет, ЗН-О-СН ); 3, 55 (мул ьтиплет, 2Н, -СН -0H); 7, 13-7,24 (мультиплет, ЗН, ароматич. водород).

ИК-спектр (KBr): 2910(-ОСН ), 780 (аром. галоген), см .

Пример 2. 1-Метил-2-хлор-люмилизергол.

Смесь из 1,54 г тонкоизмельченного гидроксида калия с 12,7 мл диметилсульфоксида перемепжвают 10 мин при комнатной температуре. При 1520 С к смеси добавляют 2,0 г 2-хлорлюмилизергола. Затем реакционную

/ смесь 35 мин перемешивают при комнатной температуре, смешивают с

0,6 г метилиодида, перемешивают еще

10 мин и выливают в 400 мп ледяной воды. Выпавший осадок отфильтровы-. вают. Фильтрат выпаривают в вакууме и остаток перекристаллизуют из ацетона. Получают 1,77 г (857) названцого соединения с т. пл. 252 С.

Н-ЯМР (DHC0d<+ ТФА) м.д.: 2,50 (дублет, ЗН, N-СН ); 2,85 (дублет, ЗН-О-СН ); 3,55 (мультиплет, 2Н, -СН ОН); 3, 73 (дублет, ЗН, индолN-CH ); 7,13-7,44 (мультиплет, ЗН, аром. водород);

ИК-спектр (KBr): 29 10 (ОСН );

2820 (индол -СН ); 730 (аром. галоген), см .

Пример 3. 1-Метил-2-бромлюмилизергол.

В качестве исходного вещества при меняют 1,0 г (0,0027 моль) 2-бромлюмилизергола и аналогично примеру

2 получают 0,78 г (757) названного соединения с т. пл. 240-242 С.

Н-ЯМР (ПМСОЙ ): 2,49 (дублет, ЗН, ИСН ); 2,97 (дублет, ЗН, ОСН );

3,55 (мультиплет, 2Н, СН ОН); 3,75 (дублет, ЗН, индол-N-СН9); 7, 177,4 1 (мультиплет, ЗН, аром. водород) .

ИК-спектр (KBr): 2910 (ОСН ), 2920 (индол-НСН ), см .

Пример 4. N-Окси-скуцинимид5-бром-никотинат (активный сложный эфир) .

1 r N-окси-скуцинимида и 5,2 r

5 †бр-никотината при 50 С растворяют в 100 мл абсолютного этилацетата и к раствору добавляют 1,77 г N Nцициклогексилкарбодиимида. Реакцион-. ную смесь 4 ч перемешивают при комнатной температуре и охлаждают до .с.

5 С. Выпавшие в осадок кристаллы без 14 лого цвета отфильтровывают. Фильтрат выпаривают в вакууме и остаток после выпаривания перекристаллизуют из этанола.

Пример 5. 2-Хлор-никэрголин.

1 r 1-метил-2-хлор-люмилизергола растворяют в 100 мл безводного пиридина и раствор смешивают с 0,96 г полученного согласно примеру 4 активного сложного эфира. Реакционную смесь 4 ч перемешивают при комнатной температуре, причем за течением реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии. По окончании реакции этерификации реакционную смесь выпаривают при пониженном давлении, выливают в 200 мл 107-ного раствора карбоната натрия и трижды экстрагируют по 30 мл хлороформом. Объединенные органические фазы промывают водой, сушат над сульфатом магния и после фильтрации выпаривают при пониженном давлении. Остаток перекристаллизуют из эфира и в случае необходимости дополнительно очищают с помощью хроматографии. Получают

i,47 r (957.) названного соединения.

Н-ЯМР (CDC1>): 2,48 (дублет, ЗН, N-СН ); 2,53 (дублет, ЗН, О-СН );

3,74 (дублет, ЗН, индол-N-CH );

7„0-7,28 (мультиплет, ЗН, аром. водород, индол); 8,45 (триплет, 1Н аром. Н); 8,9 (дублет, 1Н аром.

Н); 9,2 (дублет, 1Н, аром, Н), м,ц.

Пример 6. 2-Бром-:никэрголин.

Берут 1 г 1-метил-2-бром-momtJMзергола и готовят аналогично примеру

5 2-бром-никэрголин. Получают 1,4 r (957) названного соединения с т.пл.

142-144 С.

Найдено, что получаемые согласно изобретению и содержащие в качестве

Х новые соединения общей формулы 1 обладают ценными фармакологическими действиями. В особенности они улучшают когнитивную функцию головного мозга и активны антигипоксически, а также Ы -адренергически — блокирующе и Са — антагонистически.

Антигипоксическое действие и улучшающее когнитивные функции действие подтверждаются следующими фармакологическими испытаниями.

Исследования осуществляли на самцах SHR-крыс весом 160- 180 г, а также весом 18 — 21 r CFLP-мышах (LATI) обоего пола. Исследуемые соединения вводили крысам в объеме

45557

5 мп/кг, мышам — в объеме ) 0 мл/кг за

60 мин до начала опытов. Никэрголин растворяли в 0,47-ной винной кислоте, исследуемое вещество растворяли в

57-ном растворе ТВИНа 80 и раствор затем разбавляли до желательной концентрации физиологическим раствором хлорида натрия. Результаты указаны в процентах.

Антигипоксическое действие. (Bauma1 I. и др.: Proc. SOc

Ерх. Т her. Biol; Нью-йорк, 132, 629 (1969). Крыс (n-5) обрабатывают .15 различными дозами веществ и спустя

60 мин измеряют при гипобаргипоксических условиях (170 торр) длительность переживания. В табл. 1 указано время переживания в процентах к конт20 ролю.

Влияние на способность к обучению. (Essmann W.В., А1регп Н.: Psychol.

Rep..41, 731 (1964). Иьппей обрабатывают исследуемыми веществами в дозе

>5. 5 мг/кг и с помощью однократного E inweg (одностороннего) -метода пассивной за: щиты подвергают процессу обучения.Жи. вотных помещают в "тамбур" бокса для исследования и после того, как они по30 пали в темный бокс, они получают удар током (1,5 мА, 0,3 с) ° Спустя неделю животных контролируют; из латентного времени защиты (время вплоть до входа в бокс) берут среднее и выражают в процентах от контроля.

Влияние на гипоксическое Agnisition-подавление.

Крыс (n=4) ежедневно обрабатывают различными дозами испытуемых веществ

40 и затем в автоматизированном, двигающемся взад и вперед боксе (VKI, еже дневно 50 циклов, межсигнальное время 15 с, световое возбуждение 15 с, 10 с освещение и электрическое разд45 ражение 0,8 мА) в течение 3-х дней при нормобаргипоксических условиях подвергают процессу обучения (67 0 ). Число обусловленных реак-! ций на 3-й день сравнивают с таковым

5О, контрольной группы, отклонение выражают в процентах,(CAR 7) ° В качестве стандартного вещества используют никэрголин.

Результаты испытаний представлены в табл. 1, где средняя продолжительность переживания контрольных животных (Х + SA) : 3,3 + 0,19 мин; латентное время защиты контроля (Х + SA): 164,0 + 34,4 с для никэргоОпыт

Доза (перорально), мг/кг

Никэрголин хлор никэрго лин

Антигипоксинное действие (время переживания}, процент к контролю

Влияние на способность к обучению (латентное время защины), процент к контролю

Влияние на ги155 103

1,0

276 109

295

182 131 рб.5,0.поксическое подавление

ЯСАК (%) 150

150

2,5

10,0

Из табл. видно, что при гипобаргипоксических условиях доза 2,5 мг/кг никэрголина не влияет на среднее время переживания, в то время как 2хлор-никэрголин значительно повышает толерантность животных уже в дозе

1,0 мг/кг. Плохая трудоспособность

35 подвергнутых процессу обучения при нормобаргипоксических условиях животных нормализуется с помощью 2,5 мг/кг

2-хлор-никэрголина в то время как

7 40 стандартного вещества требуется 4кратная доза. Улучшение способности

K обучению в случае 2-хлор-никэрголина (предполагаются одинаковые дозы) значительно лучше, чем таковая никэр г еголина, Ф

В биохимическом отношении соединения исследовали на блокирующие -1-, о -2- и D-2- рецептор свойства, < а также на синантосомальное действие, Связывание coL -1-рецепторами.

Крыс (Hannove Wistar) декалитиру-, ют, кору головного мозга препарируют и гомогенизируют в 20-кратном объеме бу фера (50 ммоль трис-НС1, рН = 8,0) .Мембраны отделяют путем центрифугирования дважды в течение 15 мин при ускорении

45000 g и затем суспендируют на 1г

5 14455 лина и 77,0 + 16,4 с для 2-хлор-никэрголина; САК животных, содержащихся в нормокснческих условиях; 92,0 +

+ 1,2% CAR содержащихся в гипоксических условиях животных: 22,0+5,0%.

Таблица1.

57 в 30 мл буфера (концентрация белка

1,7-1,8 мг/мл) .

Для исследования связывания с

Ы,-1-рецепторами применяют мембранные препараты, лиганд (0,5 нмоль Нпразозина) и исследуемое соединение, общим объемом 1 мл. Пробы инкубируо ют 30 мин при 23 С, отфильтровывают через Ватман-GR/В-фильтр и промывают еще 4 раза 4 мл буфера. Для определения неспецифического связывания используют 10 мкмоль фентоламина.

Связывание col -2-рецепторами.

Крыс (Hannover Wistar) декапитируют, кору головного мозга препарируют и гомогенизируют в 30-кратном объеме буфера (30 ммоль трис-НС1, рН = 7,4).

Мембраны отделяют путем центрифугирования дважды в течение 15 мин с ускорением 45000 g и затем суспендируют на 1 r в 50 мл буфера (концентрация белка 0,9-1,1 мг/мл) .

Для исследования связывания с ос-2-рецепторами применяют мембранные препараты лиганд (1,0 нмоль Н R к х 781094= Н-1-даз оксан) и исследуемые соединения, общим объемом 1 мл. Про- бы инкубируют 20 мин при 23 С, затем наносят на Ватман-CF/В-фильтр и проiûâàþT дважды 4 мл холодного буфера.

Для определения неспецифического связывания используют 10 мкмоль фентол-4 амина.

Связывание с D-2"рецепторами.

Крыс (Hannover Wistar) декапитируют, извлекают из их головного мозга

l; полосатые препараты (Striatpraparate).

Полосы гомогенизируют в 10-кратном объеме холодного буфера (50 ммоль тряс-НС1, 120 ммоль NaC1, 2 ммоль

КС1, 1 ммоль MgC1<, 5 ммоль СаС1 и

pH =- 7,4) и центрифугируют 15 мин лри ускорении 40000 g. Полученный седимент суспензируют на 1 г в

100 мл буфера (концентрация белка

0,7-0,8 мг/мл).

Для определения связывания с D-2рецепторами применяют мембранные суспензии, лиганд (0,5 нмоль Нспироперидола) и исследуемое соединение в заданной концентрации, общим объемом 2 мл. Пробы инкубируют 15 мин лри 37 С, наносят на Ватман-CF/Вфильтр и промывают дважды 5 мл буфера. Для определения неспицифического связывания используют 1 мкмоль (+) -бутакламола.

1445557

Та блица 2

2-хлор никэрголин

Соединение икэр45 олин

IC нмоль

oL — 1

Ы -2

D-2

Ы- -1 к-2

D-2

0L-1

5,3

71,4

9,5

24,2

877

0,03

13,5 55

0,39

92,3 — СН

?С о ()

45C ++

7эО 26 7

Во всех трех описанных способах связывания рецепторов на находящейся a кювете фильтровальной бумаге получается сциптилляционный "коки

5 теиль, а на следующий день измеряют изотопную активность.

45 ++

Са — поглощение на синаптосомах.

Синаптосомные препараты готовят из коры головного мозга крыс по методу Ми и др. (P.Н. Mu, J. И. Phillis, D.1. Thierry:J. Neurochem, 39, 700 (1982). Содержание белка составляет 20 мг/мп.

Для исследования используют буо фер с установленным при 37 С с помощью Карбогена рН, равным 7 (112 ммоль, НаС1, 5 ммоль KCl, 1,3 ммоль NgC1<, 1,2 ммоль ИаН РО4, 1,2 ммоль CaCl, 10 ммоль глюкозы, 20 мысль Трис) . В ,целом имеющую объем 1 мл смесь (буфер, исследуемое вещество, 1 мг синап-, о I тосом) инкубируют при 37 С в течение 25

20 мин и затем измеряют индуцированное с помощью К (45 ммоль) 4 Са поглощение, используя в качестве контроля индуцированное с помощью Na

Ф (45 ммоль) Са — поглощение. Реакцию прекращают с помощью 5 мл буфера (120 ммоль NaC1 5 ммоль КС1: 5 ммоль

ЭДТА, 20 ммоль Трис, рН=7,4-) .,Пробы на Ватман — CP/B-фильтре промывают дважды с помощью 5 мл промывного 1 буфера (132 ммоль NaCl, 5 ммоль КС1, 1,3 ммоль

MgC1< 1,2 ммоль СаС1, 20 ммоль Трис, V рН = 7,4). Оставшуюся на фильтре радиоактивность измеряют в 10 мл сцинтилляционного "коктейля".

Результаты измерений представлены в табл. 2.

Из данных табл. 2 видно, что о адренорецепторная активность обоих соединений по величине практически одинаковая; IC -значения низкие, ° т.е. оба соединения очень активны.

Одновременно с -2-рецепторная активность 2-хлор-никэрголина в 13 раз выше,.чем таковая никэрголина. Эта ярко выраженная адренорецепторная селективность 2-хлор-никэрголина видна из соотношения селективностей D-2/сГ,-1.

Важное биохимическое действие

2-хлор †никэрголи состоит в том, что он по сравнению с никэрголином имеет в 4 раза большую активность

45 ++ при подавлении Са -поглощения синаптосомалями.

Из фармакологических и биохимических результатов можно установить, что 2 — галогенированные производные никэрголина в применении к тем же областям, что и никэрголин, являются клинически активными, однако ° их действие намного сильнее и селективнее. Результаты биохимических исследований хорошо коррелируют с обнаруживаемыми на основании фармакологических исследований сильными антигипоксическими и улучшающими когнитивные функции головного мозга действиями.

При разработке предложенного способа установлено, что введение атома галогена в начале синтеза (получение 2-галогенилизергола) дает такие преимущества: в дальнейшей части синтеза реакции протекает в течение более короткого времени, проще и с лучшим выходом, образуется меньше побочных продуктов и структурных изомеров; чем это имеет место в случае не содержаших в 2-положении никакого атома галогена промежуточных продуктов.

Формула изобретения

1. Способ получения 2-галогенникэрголинов общей формулы 1 о (-Н -O-(: О

С

l0

1445557

Составитель И. Федосеева

Техред И.Ходанич Корректор Л.Патай

Редактор М. Келемеш

Тираж 370 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 ° Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/5

М

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 6517/59

9 где Х -атом хлора нлн брома, этерификацией производного люмилиэергола с помощью производного 5бромникотиновой кислоты в присутствии пиридина, о т л и ч а ю щ и й5 с я тем, что, с целью упрощения процесса и расширения ассортимента це левых продуктов, в качестве производного люмкпнзергола используют 1-метил-2-галоген-люмилизергол общей формулы II

H где Х " имеет вышеуказанные значения, а в качестве производного 5-бромникотиновой кислоты используют активированный сложный эфир, полученный из N-оксисукцннимида и 5-бромникотиновой кислоты, и процесс проводят при комнатной температуре.