Способ определения антител к вирусу клещевого энцефалита в сыворотке крови
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения антител у больных клещевым энцефалитом и доноров иммунной плазмы, привитых вакциной клещевого энцефалита. Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа. Клетки-эффекторы добавляют к меченым хроматом натрия <SP POS="POST">51</SP>(CR) и обработанным исследуемой сывороткой клеткам-мишеням в соотношении 5/1 и при значении процента специфического высвобождения меченого хрома из разрушенных клеток-мишеней большем 12 делают вывод о наличии в сыворотке антител к вирусу клещевого энцефалита. Способ позволяет повысить чувствительность определения в 32 раза.
„„80„„159??26 союз советсних социАлистических
РЕСПУБЛИН (51) 5 r, 01 N 33/53, 33/h8
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬПИЯМ
ПРИ ГННТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К
ВИРУСУ КЛЕ1:1ЕВОГ{1 ЭНЦГФАЛИТА В CIIB0POTKE КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и касается оценки иммунитета организма к вирусу клещевого энцефалита.
Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа оценки иммунитета к вирусу клещепого энцефалита.
Способ осуществляют следующим образом.
Определеыие антител проводят в реакции антителозяписимой клеточноопосныход Cr в лунке с
7 специфического (ус след. сывороткой вь2свобо22.дення мякснмальпый выход
1 выход Cr в лунке у2 контроля f 11 ) ° 1007 . спонт.выход
SI Сг кСг
Лля контроля ставят следующие про - культуральная среда (не мспее двух бы: контроль 1 — клетки-мишени плюс - проб), контроль Il — ко2и роль токсич-, 1 (21) 4463162/30-14 (??) 19.07.88 (46) 07.10.90. Бюл. II 37 (71) Томский 2{яуч{2о-исследовательский институт Вак{{ин и cbttropoTOK (72) H.Б.Альбицкяя, Е.B,Áoãäàttlèíà, Т.ff.Полторацкая, F..È,Зягромов и И.В.Богдяшин (53) 6 15.373 (088.8) (56) Иетодические указания по вирусологической и серологической диагностике клещевого энцефалита. — Томск, изд-во ТГУ, 1972, вып. 28, с. 37-44.
2 в частности к иммунологии, и предназначено для опреде.пе2{2{я антител у больных клещевым энцефалитом н доноpnD ИмИУ22КОИ Ппя 3 2 2Ы IIPI I 22IITbtX Ittr Ir III t riot t клецевого энцефалит». Целью изобретения является повышение чувствительности и точности cr.особа. Клеткиэ2 2фекторы добавляют к меченым хромятом натрия Cr и обработанным исследуемой сывороткой клеткам-мишеням в соотношении 5:1 и при значении процента спецнф2{ческого высвобождения меченого хрома иэ Гаэру{2{енн{2х клеток-мишеней большем 12 делают вывод о наличии в. сыворотке янт22тел к вирусу клещевого энцефалита. Crroco6 позволяет повь{сит2, чувствительность .опреде22ения в 32 разя. редованной цитотоксичности, в которой в присутствии исследуемой сыворотки, сорбиров анной ня клетках-ми{22енях, происходит их раэрушепие под воздействием клеток-эффекторов. Способ включает три этапа: подгото22кя клетокмишеней, подготовка клеток-эфАекто ров, постановка реяк2{2{и. процент спе2{2{фическоГо высвобояден{{я Cr под считывают для каждого разведения исследуемой сь{воротки по формуле.
i")977?6 ности <с(!Boipoтки ". К.пет)<.ч- MT((if Hif г(люс
1"..следуемая сыворотка B п!Иti ««11!!tr b T>;) Rведе«ии (I //г0/ (контроль I T I — конт-
pnHF циточ Ок(ичности вирус" п циАи1)Е(T< itX JTH>1<")О(1И Г() )) > i(" tP I КИ Ч Я(Н(С П<) плюс клетки — э()<()ектn »f,f> к >нтp КГ1 >(Ч, )ОЛЬ С Г!С!(И<1)ц !if n . ГИ ЛИЗI(С (З KJ!e f",)Км(ппеней: гусHHf1!e эритро(;ич bl Обряботг!«ные тяиином ппюс клетки-ОА< )(1»кTr)PI Rce пробы, n!If 1TH! IP или контпольные CтявЯт B рян«ых Об<ем»!2<.. 0„220 мл. В n1t1!тf(KIK и кг)!КГ120 ilf »»tx прОбях соотн . (п:. «не клетки-аз<1>(() е к тор(1! ". клетки-миl 111(1 !!и <) J(H HR f«) f1<2, I PRT< f(HK >>читч ц)(! 1<)т т чл(11«2 н слу1(яе леток(..ич!(<зст!(Нсc! !еД" Рмnй (»ьз0110 Г)<»f l,iiЯ Kл("-" )к — м! IшенР! t (()О)пд 1!He (и B T r< ., 11 ОР В11<С 1) 0()О К/(Е )Я(Е (. 1 3)1 MRI 0, 110 мг среды из лунки кo! : РОЛЯ (: )(ОС.((Е T((C(T()ЛЬНОГr> ПЕРЕМЕШИВЯНИЯ PP с n/(e p)((HI r o, . >я с пО нтя (>! <ЫЙ I<111ход 2») радиоактивности принимают яктипность 0„110 мл супер«а(RI!TR из лупки Kn!1(p(>ля 1» П р и и е. р, Нодго i OBKR клетокм)(шеней. Гусиные эритрр>,иты, взяты". B раствор Лльсенера., /)вукрятпо от(1! (в(1ют AncARTHo-с )лень!и буйером f,(I)CН ( с рН 7, 2, готовят 5/-ную взвесь зритроци-, тов в этом буфере „K 1 мл >%-н пй взвеси 3pTFT pn1tич Он /!Оба влЯ))ч мл р я (г) вора та (п(на,. pR .) в(»(енн<> гo 1: 2 >(((»0 B <()(,I> с pII /,2, инкубируют 20 мин при ком натной Гемг(еряту;2е., зя Ге(: тpexKpRT»;i О rblf (Бяк)т в <1)0I) с 1)Н / > 2 г(г(я ceHcl! б)и) (из я)ft TH зри Гр<21(((ч <зн ис ПО)!1,:Чу(от 110 коммерче<21(ий диагностикум T $ Г(1 рН 7, 2 с 0, 5/о ПО(пад(»;npo сьгвороточного аль()у>линя. ос 1,1><у полученя((2< Kлсток-мишеней Доба влЯю 1 ж1 культурально>1 среды с:.(;:i мятом натрия Сп до конечной c„t ко(:1; ., Г ..») )<Ий изотопа в сус!чензии клеток . 10 мк,/ >. т <п;>не 90 мп«при 37 С, затем ТPeXT >»1 )Н; „1;(>В(J 11 К<>Л)(f(РТНО КЛЕТОК ДО 2 10 B 1 мл Kvcf!1т уралb>f<2!I срРды 11()дготог<)<,; кпг. r;T<-3(f)i>!Ot<òоров. . Н .<ПЧС< ТВЕ К!i, TОК-З(1)<()ЕКТОрОВ ИС— П ч Ь ) /Ti)T if<)1 О)(>» :."...1, t,f HP pt!AP pH>IPC K OH K >) 0;ili, >;:(/(Е il.- Н»((Е Из I H!T(R PHHII 3HPn BR HI;<2iT кро!>и B грацие!-," e плотности <1>иколлги пяк г(. меч >цу IIP и м. Клетки-здк1)екч;p!! .отмьпзяк)ч тр.:;-.:..ратно раствором уз((пса i» до-. --,() .,: Концентряпии ?,:) 10 0" i<ë» »:, (:i культу12яльной -r1,1 ) < .,>(З 1((i".Т !: n BKЕ )2OR KIIHH ИС ПОЛЬЗУют ;<.- .;: -уп;:.(,1(ю р ..: >!eJIyef(eго соста— i::!)!11-: 1>0 j0;, и((яктивированной (";)Рт,()чь((< и сl Bnpn TKH 1. 2 1»(1 Нерея . Йссле-, (ч п -tyõ (.г«<)рстку <,донора, бо "t íoг,. кл< п(ев! ((! ". ((TPARJTHToM/ иняк1 т(-.н.(ру!».т >HKH () 2-.((у(:01)!((.Г-;,.,.яни . : длЯ иммуноло и .:-.<,-,,: р;-;«<ц й,» О(ч»еме О, 1 мл (1чо 10 к.)c cnê: R,«1 и-,. .j,,добавляют к - (:: t<;:л<з„(уе((-. ю -. .: !:„c:ðîòêó в объеме .01 м.(т,(к „-что )bi KО«ечняя концентряс: г"<-;рсггк я н Л2 i"; составила 1 / 0 — 11 i 2 120 Ä Tlffi(уб> (1)ук)т 1) ч при 4 С. пятcr- 3 -.-.;<) Дую:»3 лунок, содер)((а П)НХ О, 1 мл кле Гок.-з()()ект(ров планшету пент рнфу Г!(Г уют ? wH! f при ЯО0е, инкуб ;(уют 12 :. в ятмос ере 57.-ного СОч, ,.1<1<-ЛГ Ок.-)н:f=,!зия )1« ".(/б". ции из кап<ДОЙ JT1)HK; с,-rjH;2RioT < /пер:,атант в объеме 0 "; 1 0 мп И И()СЛРГ(, От рядИОяКТИВ НОС Ч Ь Ffp0f2>j j на гамма-сче Гчике Гамма-12" . ! "I(2oI(e H » с пепи();:;ч, c,oro высвобождения Сг г(одсчит! !BR- ч с использо5f ваннеM Г1ри постян )Hке реакции соотношение клетки-зАйектор>1: клетки †мишеН1 в лункe ря(зно .1." 1. Р Рзу "ьтR Tbf опр) ег(еле г(ия пока зывяют Р ГГО титр антител в исследуемОЙ сыB-.0p0òêå составляет 1:2 260. Предля гяемь(Й с пос об повьппает. чувс т- вительность определения антител по сравнению с прототипо1! я 3? разя, ре3 УЛЬТЯT TfPH 3TOf> 01.(>i(1BRi0T IIO Ци<()POB0) r(e JTe HT-f TI, 5 1)97726 6 и з о б р е т е и ц я руют диагностикумом клещевого знцеф iлита, метят хроматом натрия ) Сr, ! обрабатывают исследуемой сывороткой, дг)бавляют мононуклеары периферйческой крови в соотношении 5:1, дополнительно инкубируют, определяют про" цент специфического высвобсасденйя меченого хрома из разрушенных клетокмгппеней и при его значении, большем 12, делают вывод о присутствий в сьгворотке антител к вирусу клеевого энцефалита.! г) г) р и у л а Способ оггределения антител к вирусу клег(евого энцефалита в сыворг)тке к реви путем при го TQBëå ния последо5 «ательных разведений исследуемЬй сывг)ротки и ийкубирования с антигеном с использованием гусиньгх эритроцитов, о г л и .ч а ю гг и и с я тем, что, с целью гговышения чуRcTBHTesfhHocòè и точности с и!)соба гчс)гнь)е зрит роци ты обрабатывают танином, сенсибилиэиСг)ст.-"-витель Р. Гуменюк Техред м, дг:„-. !)к Корректор И,Иуска Реда кто р А. (!!а ндор Зака з 3049 . Тира)к 530 Подпис ное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5 б Производственно-издательский комбинат "Патент", r.У)кгород, ул. Гагарина,!01
