Способ получения полиплоидных форм клевера лугового

 

Изобретение относится к биотехнологии , сельскому хозяйству, селекции и семеноводству . Согласно способу проростки семян обрабатывают колхицином при вакуум-инфильтрации , эксплантируют первичный конус нарастания на искусственную питательную среду, проводят микроклональное размножение. Полученные растения - регенеранты, высаживают .в почву, выращивают до цветения и по форме пыльцы первого соцветия оценивают плоидность. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sl)s А 01 Н 4/00, 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4837740/13 (22) 19,06,90 (46) 30.07.92. Бюл, N 28 (71) Белорусский научно-исследовательский институт земледелия и кормов (72) Л.Г.Близнюк, И.А,Гордей, Л.П,Филипович и Е.И.Чекель (56) Методические указания по полу Гению и выделению полиплоидных форм кормовых культур/ ВАСХНИЛ, отделение кормопроизводств, ВНИИ кормов им.. В.P.Вильямса, — M.. 1987, с. 7-13, Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений для получения новых исходных форм, Известен способ получения полиплоидных форм у различных кормовых культур путем обработки точек роста проростков колхицином при вакуум-инфильтрации, выращивания проростков в рассадных ящиках, оценки на плоидность каждой цветочной головки каждого растения, удаления диплоидных головок и переопылением полиплоидных, выращивания растений из полученных семян первого поколения (Со), оценки растений на плоидность по форме пыльцы (пыльца полиплоидных растений многоовальная, неправильной формы, диплоидных — продолговатая, правильной фор- . мы) и отбора нехимерных полиплоидных растений второго поколения (С1), „„5U, Ä 1750557 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЛОИДН ЫХ ФО РМ КЛ Е В Е РА ЛУГОВОГО (57) Изобретение относится к биотехнологии, сельскому хозяйству, селекции и семеноводству. Согласно способу проростки семян обрабатывают колхицином при вакуум-инфильтрации, эксплантируют первичный конус нарастания на искусственную питательную среду, проводят микроклональное .размножение. Полученные растения — регенерэнты, высаживают .р почву, выращивают до цветения и по форме пыльцы первого соцветия оценивают плоидность. 1 з,п. ф-лы, 3 табл.

Недостатки способа-растения, выращенные из обработанных проростков (Cp) имеют химерное строение тканей; длительный процесс получения нехимерных поли- Ql плоидов (из проростков семян выращивают (1 растения на протяжении двух поколений (у для выделения нехимерных полиплоидов). у

Цель изобретения — ускорение получения нехимерных полиплоидов.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения полиплоидных д форм клевера nyroeoro, включающему обработку проростков семян колхицином при вакуум-инфильтрации, . выращивание растений из проростков, оценку плоидности соцветий по форме пыльцевых зерен, отбор полиплоидных растений, после обработки проростков колхицином отчленяют первичные конусы нарастания и размножают их микроклонально на искусственной питательной среде, иэ вегетативного потомства

1750557

20 каждого экспланта отбирают нехимерные полиплоидные растения-регенеранты, при этом оценивают плоидность по форме пыльцы первого соцветия, Пример 1, Семена клевера лугозого поверхностно стерилизуют и в асептических условиях высаживают на искусственную питательную среду Гамборга Вг >в чашки Петри. 4-6-дневные проростки для синхронизации клеточных делений помещают в холодильник при 1 С на 2 сут, а потом на 1 ч в термастат при 27-28 С, Затем проростки погружают в стерильный 1 Д-ный водный раствор колхицина и сосуд, в котором находятся проростки, помещают в вакуум-камеру, давление в которой постепенно снижают до 100 мм рт.ст, с последующим повышением его до уровня атмосфернсго давления. Обработку в вакуум- камере повторяют 4 раза через 1 ч, Обработанные колхицином проростки промывают автоклавированной дистиллированной водой в стерильных условиях, отчленяют эпикотили и высаживают в среду для микроклонального размножения. Среда содержит минеральные соли, витамины и фитогормоны, Состав приведен в табл,1.

Зкспланты культивировали на световых стеллажах с освещенностью 12 клк, температурой 22 ч-2 С, фотопериодом 16 ч. В потомстве каждого экспланта отбирали регенеранты, которые имели признаки тет раплоидных растений аналогично тетраплоидным растениям, полученным традиционным путем, а именно; более LUMрокие листовые пластинки, более темную окраску листьев, ярче выраженную опушен. ность, утолщенные листовые черешки. Отобранные регенеранты пассировали на среду того же состава для окоренения, но без витаминов и гормонов. По мере появления корней регенеранты высаживали в искусственную почву "Бион-112" и доращивали растения до фазы цветения. В период цветения определяли плоидность по . форме пыльцевых зерен каждой цветочной головки всех окорененных растений-регенерантов (табл.2).

Как видно из табл,2, среди регенерантов не обнаружено ни одного растения, на котооом образовались бы цветочные головки разной плоидности, т.е, не обнаружено ни одного химерного растения, что дает возможность по первой цветочной головке отбирать тетраплоидные нехимерные растения. Всего проанализировано 334 растения-регенеранта сорта Йыгева-433 (из них оказалось нехимерных тетраплоидов 141 и диплоидов 183) и 97 растений-регенерантов селекционного образца Крупноплодный (из них нехимерных тетраплоидов 57, диплоидов-40), Период получения полиплоидных фарм ограничивался тремя пассажами на питательной среде и периодом роста их в искусстBBHHOA почве, т.е. от 3 до 5 мес, в условиях искусственного климата.

Пример ы 2 и 3, Процесс вели аналогично примеру 1.

Результаты представлены в табл.2.

В табл.3 представлено влияние различных концентраций 6-БАП на результаты способа, Предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет ускорить получение нехимерньгх полиплоидов л их использование в селекционном процессе.

Формула изобретения

1, Способ получения полиплоидных форм клевера лугового, включающий обработку проростков семян колхицином при вакуум-инфильтрации, выращивание растенил, оценку плоидности соцветий и отбор полиплоидных форм, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения получения нехимерных полиплоидов, выращивание растений осуществляют путем помещения первичного конуса нарастания проростков на искусственную питательную среду и последующего их микроклонального раэмно>кения, затем полученные растения переносят в почву, выращивают до цветения и плоидность растений оценивают по форме пыльцы у первого соцветия.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что микроклональное размножение осуществляют на питательной среде Гам.борга ВБ, в которую дополнительно вводят

10 мгlл 6-бензиламинопурина и 0,1 мг/л индолилуксусной кислоты.

17505 7

Таблица 1

Состав компонентов питательной среды для микроклонального размножения клевера лугового

Сахароза 30000, рН 5,7-5,8

Таблица 2

Выход полиплоидных форм клевера лугового при обработке проростков колхицином и размножении зпикотелей на искусственной питательной среде (количество, шт.).

Таблица 3

Влияние высоких доз 6-БАП на регенерационную способность пазушных почек клевера лугового (сорт Йыгева-433}, среда культивирования В5+0,1 мг/л ИУК+ 6-БАП.

1750557

Продолжение тэлб, 3

Составитель Л.Близнюк

Редактор Л.Пчолинская Техред M.Mîðãåíòàë Корректор О.Кравцова

Заказ 2632 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушскэя наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", I Ужгород, ул.Гагарина, 101