Способ прогнозирования течения пневмофиброза
Использование: медицина, а именно пульмонология и фтизиатрия, для прогнозирования развития пневмофиброза у больных с воспалительными и гранулематозными заболеваниями органов дыхания. Цель: повышение точности и специфичности способа. Сущность изобретения: из пробы бронхоальвеолярного смыва получают сурфактат, в котором определяют уровень фосфатидилхолина и при значении этого показателя 1,20 - 16-49 мкмоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значении 16 - 53 - 22,65 мкмоль Р/л неблагоприятное. Положительный эффект: точность прогноза составляет 93,2%. 1 табл.
, 8
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧFСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/50
ГОСУДАРСТВЕННОЕ flATL×ТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОП ИСАН И Е И ЗОБ РЕТЕ Н ЙЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!
Ф ч ОО с ! () <„) ЬЗ (21) 4834076/14 (22) 04.06.90 (46) 07.12.92, Бюл, N 45
71) Минский государственный медицинский институт и Научно-исследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии (72) А,Д.Таганович, Г.Л.Гуренич, А.К.Абрамовская, E.M.Ñêðÿãèíà и Г.Н.Тамашакина (56) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ПНЕВМОФИБРОЗА (57) Использование; медицина, а именно пульмонология и фтизиатрия, для прогнозиИзобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии и фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пневмофиброэа у больных с воспалительными и грануломатозными заболеваниями органов дыхания, Известен способ прогнозирования развития фиброэных изменений в легких, основанный на определении в крови больных содержания гистамина и гистаминопектического индекса при увеличении содержания первого показателя и снижении гистаминопектического индекса, где прогнозируют развитие пнеэмофиброза в исходе заболевания легких, Однако способ является мало информативным, поскольку содержание гистамина в кровотоке изменяется при целом ряде физиологических и патологических состояний, не связанных с легочной патологией, и кроме того, имеет диагностическое значение только в детском возрасте, Наиболее близким к заявленному способу по технической сущности и достигае» SU 1780002 Al рования развития пневмофиброза у больных с воспалительными и гранулематозными заболеваниями органов дыхания. Цель; повышение точности и специфичности способа. Сущность изобретения; из пробы бронхоальвеолярного смыва получают сурфактат, в котором определяют уровень фосфатидилхолина и при значении этого показателя 1,20 — 16 — 49 мкмоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значении 16 — 53 — 22,65 мкмоль Р/л неблагоприятное. Положительный эффект: точность прогноза составляет 93,2% 1 табл. мому результату является способ прогнозирования развития пневмофиброэа путем подсчета количества оэзинофилов в бронхоальвеолярном смыве (БАС). На основании длительных динамических наблюдений авторами установлено, что увеличение числа эозинофилов в БАС свыше 70000 в миллилитре или 3% от общего количества выделенных. клеток является критерием, указывающим на последующее прогрессирование склеротических и фиброзн ых изменений в легких и, наоборот, содержание данных клеточных элементов в БАС ниже указанного уровня свидетельствуют о стабильном течении пневмофиброэа.
Однако данный способ имеет ряд недостатков.
Во-первых. способ обладает недостаточной чувствительностью 75,0%, а в группе больных со стабильными фиброзными проявлениями 58,3%, что прежде всего связано с относительно малым содержанием эозинофиловв БАСпо отношению ко всем клеточным элементам и, следовательно, 1780002 цен!Триф/х:ные пробип1..и и IIBÖ1ÃÐÈÓ Г!1гуи..т в течение 10 — 15 мин со скоросг1,1о i500 оборотов в 11 мин.
Всю надосадочну.о жидкость используют для получения сурфактанта. Сурфактант получают методом Абрамс. Для этого надосадочную жидкость центрифугируют при
1000 g в течение 1 ч. Белки крови и другие растворимые примеси удаляют. Осадок, содержащий фракци1о сурфактанта, суспендивозможной вариабельностью результата при подсчете клеток под микроскопом.
Во-вторых, на полученные результаты
1астс может влиять примесь эозинофилов в11еальвеолярного происхождения, которые г1оп"-,öa:î - в БАС из крови в результате кровоточивости или случайного повреждения глизистой бронха при бронхоскопии, либо из бронхиального секрета у больных с острыми и хроническими воспал1лтельными заболеваниями бронхиального дерева, В-1ретьих, способ недостаточно специ-,1чен для прогнозирования фиброза легких, поскольку количество эозинофилов в
БАС увеличено у длительно курящих лиц, при различных аллергических состояниях, в частности бронхиальной астме до 20 Д.
Все вышеуказанные факторы нс позволя1от широко использовать данный способ прогнозирования развития пневмофиброза в клинической практике, как не обладающий необходимыми точностью и специфичностью.
Цель изобретения — повышение точности и специфичности способа, Поставленная цель достигается тем, что иэ бронхоальвеолчрного смыва больных выделя1от суфрактант, исследуют в нем содержание фосфолипидных компонентов и при содержании фосфатидилхолина (ФХ) от 1,20 до 16,49 мкМоль фосфора (P)/ë лаважной жидкости прогнозируют уменьшение или стабиллзацию фиброэных изменений в легких, а при значениях ФХ сурфактанта от
16,53 до 22,65 мкМоль (Р)/л прогнозируют прогрессирование пневмофиброза у боль:; j i.IX, Способ осуществляется следующим образом, Бронхоальвеолярный смыв получа1от во время проведения планового фибротрахообронхологического исследования при поступлении больных в стационар, Забор
БАС производят по методлке, разработанной Центральным HNN туберкулеза М3
СССР. В соответствии с данной методикой после введения фибробронхоскопа производят осмотр слизистой бронхов и бронхоскоп устанавливают в устье среднедолевого бронха, затем подвига1от микроирригатор до устья бронхов 5 — 6 порядка, С помощью шприца через микроирригатор дробно вводят до 20 мл (всего 100 — 150 мл) стерильного флзиологического раствора с рН 7,2 — 7,4, прогретого до температуры 38-40 С. После каждого введения жидкости с помощью вакуум-аспирата через введенный микроир5
10 руют в 207;-ном растворе NaC1, имеющем плотность 1,15 гlмл, и центоифугируют третий раз при 1500 g 25 — 30 мин. Фракция сурфактанта флотирует на пове; хность ра:твора в аиде пленки белого или бледно-желтого цвета, Пленку снимают, диспергиру1от в 5 мл 0,9%-ного раствора NaCl, диалиэуют против 0,90/o-ного раствора INaCl при 4ОС в течение 12 ч, К сурфактанту, полученному из БАС, приливают смесь хлороформметанола (2, 1) из расчета 20 мл на 1 мл суспензии сурфаKтанта. Экстракци1о вецут при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем экс20
25 тракт фильтруют через обезжлренный Gyмажный фильтр. Смесь оставляют на несколько часов в холодильнике для расслоения фаз. Затем верхнюю водно-метаноловую фазу отсасывают, а н vi HIoio, содержащую липиды, упаривают с помощью водоструйного насоса. Полученный осадок, растворенный в хлороформе, наносят на стеклянные пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля, в виде пятна, Разделение фосфолипидов проводят методом восходящей хроматографии в системе растворителей хлороформ — метанол — уксусная кислота — вода (50, 30: 8: 4), Пластлнки высушивают при комнатной температуре до исчезновения запаха компонентов разделяющей смеси. Фосфолипидные фракции проявляют в парах йода. B сурфактанте БАС регистрируют на основании индентификации
4 фракции; лизофосфатидилхолин, сфингомиеллн, фосфатидилхолин(самая большая фракция) и фосфат иди л этан оп амин. (оличественный учет содержания фракции фосфатидилхолина осуществляют по фосфору общепринятым методом.
Для этого данную фракци1о вместе силикагег ем соскребают в пробирку и минерализуют в концентрированной серной кислоте при 225ОС в течение 60 мин. Сжигание фосфора происходит при добавлении
307-ного раствора перекиси водорода, Избыток перекиси удаляют добавлением нескольких капель 33,— íîãî раствора сульфита натрия, В к- æäó,о пробу добавляригатор отсасывают ее в стерильную охлажденную емкость. Полученный БАС ют 1,0 мл 2,5 -ного молибдата аммония и фильгру1о1 через 4 слоя стерильной марли в 0,5 мл 2;ь-ного раствора аскорбиновой кис1780002 лоты. Пробирки помещают в кипящую баню на 10 мин. Пробы колориметрируют на спектрофотометре СФ-4А при длине волны 822 нм. Для построения калибровочного графика использовали растворы одноэамещенного фосфорнокислого калия.
Полученные результаты пересчитывают и выражают содержание фосфора в мкМоль
p/л лаважной жидкости, Пример 1. Больной К. 41 года (ист, болезни М 2845) поступил в стационар с жалобами на кашель с мокротой, слабость.
Считает себя больным около месяца, к врачам не обращался. При рентгенологическом исследовании у больного в верхней доле правого легкого обнаружен участок инфильтрации легочной ткани без четких контуров, неоднородной структуры, единичные очаговоподобные тени средней интенсивности.
Легочный рисунок в этой зоне избыточен, деформирован. Корни структурны. На остальных участках легочные поля без видимой патологии, Больному бы установлен клинический диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада.
В дальнейшем диагноз был подвержден обнаружением при посеве мокроты микобактерий губеркулеза.
При поступлении в стационар больному проведена поднаркоэная трахеобронхоскопия с взятием для исследования БАС, 3ндоскопическое исследование не выявило у больного патологии со ст. роны бронхиального дерева, Из БАС по вышеописанной методике выделен сурфактант. Содержание в нем фракции фосфгтидилхолина составило
1,20 мкМоль Р/л, Больному проводилось лечение 3 противотуберкулеэными препаратами: иэониазидом, стрептомицином и рифампицином. С 3-го месяца вместо стрептомицина больному назначен этамбутол.
Помимо противотуберкулезных преператов больной получал ингаляцию с солютизоном, витаминотерапию, курс ультразвуковой терапии на правую половину грудной клетки.
Через 6,5 месяцев лечения больного выписывают из стационара с диагнозом; очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК вЂ”, На рентгенограмме при выписке в верхней доле правого легкого определяются плотные очаги на фоне избыточности и деформации легочного рисунка. При динамическом исследовании больного через год после поступления в стационар на рентгенограммах картина в легких остается прежней, При сопоставлении с предыдущей рентгенодокументацией не отмечено про5
55 грессирования фиброзньх изменений в лег ких, Таким образом в данном случае в соответствии с формулой предполагаемого изобретенияя низкое содержание Больная получала стандартное противотуберкулезное лечение 3 противотуберкулезными препаратами: изониазидом, стрептомицином, рифампицином на фоне патогенетической терапии, Диагноз у больной был подтвержден обнаружением микобактерий туберкулеза в промывных водах бронхов бактериологическим методом. Через 4 месяца при выписке больной иэ стационара рентгенологически в верхней доле правого легкого определялась густая тяжистость, мелкие интенсивные очаговые тени. Усилен легочный рисунок в прикорневых отделах обоих легких. Больная выписана из стационара с диагнозом: очаговый туберкулез в доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК вЂ”, При рентгенологическом исследовании спустя 8 месяцев, в верхней доле правого легкого выраженные фиброзные изменения, интенсивные очаги, Легочный рисунок в обоих легких усилен, в прикорневых отделах деформирован. При сопоставлении с предыдущими рентгенограммами отмечается прогрессирование и невмосклероэа. Таким образом у данной больной содержание ОХ в сурфактанте составило 16,53 мкМоль Р/л, что в соответствии с формулой изобретения указывает на прогрессирование пневмофиброза. Такое прогрессирование и имело место у данной больной на фоне благоприятной динамики туберкулезного процесса в верхней доле правого легкого. В таблице приведены данные содержания фосфатидилхолина в сурфактанте, вы1760002 деленного из БАС у больных с различной динамикой фиброзных изменений в легких, Способ апробирован в ЦНИИ туберкулеза МЗ СССР. Составитель А,Таганович Техред М,Моргентал Корректор M.Màêñèìèøèíåö Редактор В,Кузнецова Заказ 4432 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Благодаря высокой точности, специфичности, воспроизводимости данный способ может быть использован в любом крупном пульмонологическом стационаре. Следовательно, новая совокупность признаков позволила получить новый и значительный положительный эффект. Формула изобретения Способ прогнозирования течения пневмофиброза, включающий взятие пробы бронхоальвеолярного смыва и ее лабора5 торный анализ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и специфичности способа, из смыва получают сурфактант, в нем определяют уровень фосфатидилхолина и при значении этого по10 казателя 1,20 — 16,49 мкМоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значениях 16,53 — 22,65 мкМоль Р/л — неблагоприятное
