Способ лечения больных с печеночной недостаточностью

 

Предложен способ лечения больных с печеночной недостаточностью путем сочетанного применения гемоперфузии крови больного через взвесь криоконсервиров, гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки. Гепатоциты проявляют не только детоксицирующую, но и сорбцию факторов регенерации . Для восполнения возникающего дефицита факторов регенерации при перфузии через гепатоциты и повышения интенсивности восстановительных процессов в поврежденной печени дополнительно в контур перфузии вводятся фрагменты ткани криоконсервированной селезенки, взятой в весовом отношении с гепатоцитом 1:1 ив количестве 1,1 ± 0,1 г/кг при скорости перфузии 20-40 мл/мин в течение 1,5-2 ч. 9 табл.

союз соВетских социАлисти (EcKvlx

РЕСПУБЛИК (sl)s А 61 M 1/34

f е-. гнив ея - сбь«..,! ь. ;1вь. .,1;ь!

3 . Льв3,гго

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ вЂ” ---"--"-

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21)4913261/14 (22) 20.02.91 (46) 07,05.93, Бюл, 17 (71) Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов (72) Н.А,Онищенко, И,Г.Оржеховская, А,B.Áeëüêoâ, О.В.Полосина и Ф,Х.Базиева (56) Шумаков В.И и др. Способ получения и консервации клеток печени для экстракорпорального лечения печеночной недостаточности. — M„1990. (54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ (57) Предложен способ лечения больных с печеночной недостаточностью путем сочетанного применения гемоперфузии крови

Изобретение относится к экспериментальной и клинической медицине, а именно к гепатологии.

Целью изобретения является сокращение сроков восстановления функциональной активности поврежденной печени и увеличение длительности периода ремиссии за счет прекращения сорбции из крови факторов регенерации во время перфуэии.

Поставленная цель достигается тем, что дополнительно проводят гемоперфузию со скоростью 20-40 мл/мин в течение 1,5-2 ч через фрагменты ткани криоконсервированной ксеноселезенки, взятой в весовом отношении к гепатоцитам 1:1 и общим расходом ткани селезенки 60-80 г.

До сих пор гемоперфузия через селезенку проводилась лишь с целью регуляции противоинфекционного иммунитета у больных. (Биогемосорбция путем экстракорпорального подключения донорской селезенки/

„„. Ж „„1813453 Al больного через взвесь криоконсервиров, гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки.

Гепатоциты проявляют не только детоксицирующую, но и сорбцию факторов регенерации. Для восполнения возникающего дефицита факторов регенерации при перфузии через гепатоциты и повышения интенсивности восстановительных процессов в поврежденной печени дополнительно в контур перфуэии вводятся фрагменты ткани криоконсервированной селезенки, взятой в весовом отношении с гепатоцитом 1:1 и в количестве 1,1 + 0,1 г/кг при скорости перфуэии 20-40 мл/мин в течение 1,5-2 ч. 9 табл.

/ Под ред. проф. А.Б.Цыпина (обзор ВНИИМ и МТИ), — M„1987, вып. 6, 10 с,).

Данный способ удовлетворяет критерию "новизна" и "существенные отличия", поскольку не известно использование экстракорпоральной перфузии крови больного через смесь тканей селезенки и изолированных гепатоцитов с целью ускоренного вос- Q0 становления функциональной активности а поврежденной печени, а также предотвра- (Д щения удаления из кровотока во время перфу- ф„ зии факторов, стимулирующих регенераторный у процесс.

Способ осуществляется следующим образом, После внутривенного введения больно му (реципиенту) гепарина в дозе 0,03-0,05 мл/кг(10-15тыс, единиц) проводят пункцию двух локтевых вен для подключения перфуэионной системы, в

Коннекторы перфузионной системы заполняют физиологическим раствором с ге1813453 парином (400 мл 0,85 NaCI + 5 тыс. ед, гепарина), а съемную колонку этой системы заполняют гепатоцитами.

В качестве съемной колонки используют капельницу от системы для переливания крови,ПК-22-02. Для ее заполнения вскрывают пакет со стерильной системой, отсекают приводящую и отводящую трубку и последовательно объем ее заполняют активированным углем, неорганическим кварцевым стеклом, альбумином; в последнюю очередь колонку заполняют размороженными изолированными гепатоцитами (ИГ).

Приготовление колонки к работе начинают с ее полного заполнения стерильным физиологическим раствором. Затем в указанной последовательности через нее пропускают стерильные взвеси соответствующих веществ. В качестве основного сорбента использовали активированный уголь марки

СКН-1К, выпускаемого заводом медицинских препаратов, г. Киев, Уголь должен полностью покрывать фильтр капельницы, Сверху уголь перекрывают слоем неорганического кварцевого стекла марки СМП-11000 (или СМП-1м-2000); представляющего собой неорганическое кварцевое стекло, обработанное поливинилпирролидоном, Слой стекла имеет толщину примерно 1 см, соотношение уголь/стекло составляет 3:2. Предварительно стекло держат 3 ч в 8),-ном растворе бикарбоната натрия и стерилизуют в течение 2 «в зтиловом спирте, Отмывку от спирта производят стерильным раствором Рингера. Затем через колонку пропускают 50 мл 10,— íîãî человеческого или бычьего альбумина, что необходимо для лучшей фиксации гепатоцитов и предотвращения контакта крови со стеклом, В последнюю очередь в колонку подают взвесь размороженных ИГ. Для заполнения одной колонки достаточно 20 мл густой взвеси ИГ. Такая колонка готова к применению, Ток крови по ней должен иметь направление от гепатоцитов к углю, Перед подключением сорбционной колонки размороженные ИГ отмывают от криопротектора стерильным физиологическим раствором. Затем приступают к принудительной вено-веноэной перфузии крови больного через ИГ с помощью непульсирующего насоса со скоростью 20-40 мл/мин в течение 25-30 мин. Через 25-30 мин перфузии производится смена колонки на свежезапвлненную ИГ, Всего за время процедуры подключают в систему три-четыре колонки с ИГ, общим расходом биоматериала 60-80 г. Затем приступают к принудительной вено-вЕнозной перфузии по той же системе через фрагменты ткани криоконсервиро5

55 ванной селезенки, которыми заполняют новую съемную колонку от системы ПК-22-02, Для заполнения капельницы фрагментами ткани ксеноселеэенки вскрывают новый пакет со стерильной системой для переливания крови, отсекают коннекторы входа и выхода капельницы, заполняют ее физиологическим раствором, а затем засасывают B нее взвесь деконсервированных фрагментов ткани селезенки, фиксирующихся на сетке капельницы потоком жидкости и крови. Средний размер фрагментов ткани селезенки 1 х 1 мм, количество ткани в одной капельнице до 15-20 г. Перед подключением капельницы с фрагментами ткани селезенки в перфуэионную систему— размороженные фрагменты ткани селезенки отмывают от криопротектора стерильным физиологическим раствором. Скорость вена-веноэной перфуэии 20-40 мл/мин, длительность перфуэии 1,5-2,0 ч, смена колонок производится через каждые 20-30 мин, Всеro на одно подключение требуется три-четыре колонки с фрагментами ткани селезенки, при использовании которых у реципиента не возникает озноба, беспокойства или каких-либо других неприятных ощущений, Всего на лечебную процедуру расходуется 60-80 г ИГ и 60-80 фрагментов ткани селезенки, Общий расход биоматериала составляет 120-160 г, а общее время процедуры 3-4 ч.

В укаэанной процедуре использовали. изолированные криоконсервированные гепатоциты и фрагменты ткани селезенки, получение и хранение которых производилось следующим образом.

Взвесь изолированных гепатоцитов получают в стерильных условиях. После лапаротомии отмывают и заполняют сосуды аллогенной или ксеногенной (свиной) печени охлажденным до 12-14 С раствором Евро-Коллинз, затем следует иссечение и инкубация печени в этом же растворе в течение 15-18 ч при 4-6 С. Затем производят канюляцию воротной вены печени и в течение 10 мин нерециркуляторно перфузируют печень бескальциевым ЭДТА содержащим раствором при 37 С, После чего в течение 10 мин при 37 С производят рециркуляторную перфузию печени 0,127,-ным раствором очищенной коллагеназы. Все время перфузат оксигенируется 47 карбогеном. После этих манипуляций проводится мягкое механическое диспергирование печени, фильтрование полученной суспенэии изолированных гепатоцитов (ИГ) через нейлоновое сито, Отфильтрованную массу трехкратно отмывают физиологическим раствором при 4 С. Затем суспензию ИГ инкубируют в 107, растворе

1813453

30

40 криопротектора ."Димексид" в течение 10 мин при 4 С, после чего полученную массу разливают в пластиковые контейнеры объемом в 10 мл и замораживают согласно программе. Охлаждение производят со скоростью 1-2 С/мин до (-50) - (-60), а затем контейнеры погружают в жидкий азот — этап быстрого замораживания, Об окончании процесса замораживания судят по прекращению выделения паров азота. Контейнеры с замороженными ИГ быстро (в течение нескольких секунд) переносят для длительного хранения в низкотемпературный банк, Непосредственно перед клиническим использованием производят размораживание

ИГ на водяной бане при 37 С с течение 5-10 мин, Ф рагменты ткани селезенки получают в стерильных условиях следующим образом.

После лапаротомии иссекают селезенку, производят мягкое механическое измельчение ткани на холоду и затем продавливают ее через металлическое сито с размером пор

1 х 1 мм. Измельченную ткань трехкратно отмывают стерильным физиологическим раствором при температуре + 4 С. Затем

r роизводят инкубацию фрагментов селезен. ки в течение 30 мин при комнатной температуре в 13;(,-ном растворе криопротектора

"Димексид", Димексид разводится средой

Хэнкса„После инкубации взвесь фрагментов селезенки разливают в пластиковые контейнеры объемом 10 мл и эамораживают согласно программе. Охлаждение производят со скоростью 1-2 С до (-50) - (-60) С, а затем контейнеры погружают в жидкий азот — этап быстрого замораживания. Об окончании процесса замораживания судят по прекращению выделения паров азота, Контейнеры с замороженными фрагментами селезенки быстро (в течение нескольких секунд) перечосят для длительного хранения в низкотемпературный банк.

Непосредственно перед клиническим использованием производят. размораживание взвеси фрагментов селезенки на водяной бане при 37ОС в течение 5-10 мин.

Пример 1, Больной Семенихин А.П„ история болезни № 683, поступил в больницу МПС ¹ 4 им. Семашко 16,08,89 г, cдиагнозом; смешанный цирроз печени с выраженной гепатоцеллюлярной недостаточностью, портальная гипертензия.асцит, печеночная энцефалопатия. В связи с отсутствием эффекта от проведения традиционной терапии печеночной недостаточности, включающей применение преднизолона — 180 мг, было решено 20.10.89 провести лечение методом экстракорпорального подключения клеток печени (изолированных гепатоцитов) в сочетании с фрагментами ткани селезенки. Для этого проводили гепаринизацию больного (10 тыс. ед, гепарина), проводили пункцию двух локтевых вен и подклю али подготовленную к работе перфуэионную систему ПК22-02; капельница — колонка этой системы была заполнена 20 мл густой взвеси клеток печени по методике, описанной выше. Скорость гемоперфузии составляла 30 мл/мин; через каждые 30 мин колонка с ИГ заменялась свежей. После подключения четырех колонок приступили к подключению колонок — капельниц с фрагментами ткани селезенки, методика получения которых описана выше, Каждая колонка содержала до 20 r ткани селезенки, время перфузии через колонку 30 мин, скорость перфуэии кровью 30 мл/мин, всего было подключено четыре колонки с фрагментами ткани селезенки. Общее время перфузии составило 4 ч, Перфузия прошла без осложнений, профилактически после завершения процедуры больному введено 2 мл супрастина. По завершении перфуэии отмечено отчетливое снижение общего и прямого билирубина, тенденция к снижению мочевины, щелочной фосфатазы, отсутс вие изменения уровня у-глобулинов и повышение уровня лизоцима в плазме крови. Повышениеуровня лизоцима в плазме крови на фоне снижения билирубина и других показателей свидетельствует, по нашему мнению, о поступлении его иэ ткани селезенки, через которую проводилась перфузия. На следующий день после пе рфузии состояние больного субъективно стало лучше и эта положительная динамика постепенно нарастала (см. табл. 1), свидетельствуя о реализации восстановительного процесса в паренхиме поврежденной печени: достоверно снизился уровень общего и прямого билирубина, а также уровень мочевины крови. Из ферментов достоверно снизился уровень 1целочной фосфатаэы, Лизоцим поддерживался на более высоких цифрах по сравнению с контролем, Пример 2. Выбор режимов гемоперфуэии (скорость перфузии и длительность перфузии) через фрагменты криоконсервированной ткачи ксеноселезенки.

Выбор режимов гемоперфузии осуществляли в опытах на собаках с экстракорпоральной принудительной вено-венозной гепоперфузией через фрагменты ткани селезенки свиньи по одноразовой системе для переливания крови. Для этого капельницу перфузионной системы ПК-22-02, заполненную фрагментами ткани селезенки, (-15 г), подключали через канюли к правой и левой бедренной вене. С помощью непульсирующего (роликового)насоса (р-р 1-05) созда1813453 вали различные потоки перфузии, колеблющиеся от 10 до 50 мл/мин. Выбор оптимальной скорости перфузии через порцию фрагментов ткани ксеноселезенки осуществляли по вено-еенозной разнице рН и р02 через, 40 мин с определенной заранее установленной скоростью. Результаты проведенных опытов представлены в табл. 2.

Сопоставляя ЛрН: Ар02 е зависимости от скорости вено-венозной перфузии, мы нашли, что скорость 20-40 мл/мин (средняя скорость ЗО мл/мин) является оптимальной для поддержания жизнедеятельности изолированных фрагментов ткани селезенки, ибо при скорости потока 10 мл/мин достоверно выявляются признаки нарастающего метаболического ацидоза; при скорости 50 мл/мин и выше возникает переполнение капельниц, контролирующих поток перфузии.

Для определения длительности культивирования порции фрагментов ткани селезенки, в капельнйце перфузионной системы (вес 15 г) мы исследовали динамику изменения Л рН и Ьр02 через каждые 10 мин вено-венозной перфузии через фрагменты ткани селезенки с постоянной скоростью 30 мл/мин. Результаты этих опытов представлены в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что начинал с 40 мин начинает снижаться потребление кислорода тканью селезенки и усиливаться явления метаболического ацидоза, которые к 50-й мин перфузии становятся достоверно выраженными, На основании этих данных мы пришли к заключению, что оптимальным сроком перфузии через 15 r фрагментов ткани селезенки со скоростью 30 мл/мин (20-40 мл/мин) является 25-30 мин; 40-минутная перфузия через одну колонку является предельно допустимым сроком.

Пример 3. Определение активной массы фрагментов криоконсервироеанной ткани ксеноселезенки. Активная масса фрагментов криоконсервированной ткани селезенки определялась нами по биологическим реакциям животного: по изменению реактивной температуры у собак через 2 ч после завершения перфузии (определение уровня антигенной нагрузки) и по способности лимфоцитов стимулировать антителообразоеание на эритроциты барана в условиях адоптивного переноса, (Антителообразование — важнейший показатель участия иммунной системы в регенераторных реакциях).

Для этого проводили опыты нэ мышах линии

С 57 В L/6. Выделенные из селезенки мышей-доноров лимфоциты — (спленоциты) в количестве 1 х 10 клеток переносили в организм летально облученных сингенных ре5

ЗО

55 ципиентов через 17 ч после внутрибрюшинного введения донора 0,5 мл инкубата. В качестве инкубата использовали кровь сингенных животных, в которой в течение 2 ч при 37"С, р02 = 80-100 мм рт. ст, и постоянном встряхивании выдерживали фрагменты криоконсервированной ткани селезенки различной массы; от 0,4 до 1,6 г/кг (или

0,4-1,6 мг на 1 мышь весом 10 г).

Через 7 суток (Юдина Н.В. Реакция лимфоидной. ткани на повреждение и восстановление органов с разной восстановительной реакцией: Автореф. дис, канд. 1980, 17 с) после иммунизации и переноса лимфоидных клеток в селезенке реципиентов определяли число антителообразующих клеток (АОК) методом локального гемолиза на геле (Jerne, Nordin 1963).

Исследование показало (табл. 4), что интенсивный прирост АОК в селезенке реципиентов начинается после введения инкубата, где находилась селезеночная ткань массой

1,0 г/кг (л). При дальнейшем увеличении инкубируемой массы селезеночной ткани прирост АОК возрастал не достоверно (р > 0,05).

Было отмечено также, что при дозе криоконсервированной ткани ксеноселезенки 2.2-2,4 г/кг имеет место кратковременный подъем ректальной температуры у собак в течение

2 ч после перфузии, а при дозе ксеноселезенки 2,6-2,8 г/кг веса собаки достоверный подьем температуры на 0,5-1,0 С наблюдался свыше 2 ч после перфузии, что указывает на избыточную антигенную нагрузку на организм, На основании проведенных биологических тестов нами была установлена активная масса фрагментов криоконсервированной ткани селезенки, которая составила 1,0-1,2; 2,2-2,4 г/кг.

Пример 4. Выбор соотношений активной массы криоконсервированных гепатоцитов и фрагментов ксеноселезенки, способных ускорить регенерацию поврежденной печени.

Эту работу мы начали с определения минимальной биологической дозы гепатоцитов, не вызывающей после гемоперфузии выраженного и стойкого повышения температуры у собак, Оказалось, что при снижении количества клеток печени с 2,8 до 1 г/кг веса животного) использовали густую взвесь гепатоцитов, содержащую в 1 мл 2 10 клеток печени) че6 рез 2 ч после завершения гемоперфузии (2 ч перфузии со скоростью 30 мл/мин) повышенная температура у собак наблюдалась при использовании гематоцитов в капельнице-резервуаре в дозе 2.8-2,6 r/êã, Начиная с дозы 2,4-2,2 г/кг температура у собак через 2 ч после гемоперфузии повышалась

1813453

10 не достоверно (р > 0,05), Эта доза гепатоцитов была признана нами оптимально допустимой, Сопоставляя эти данные с результатами по определению оптимальной биологической дозы ткани селезенки (пример 3) мы пришли к заключению, что суммарная биологическая доза криоконсервированных гепатоцитов так же как и фрагментов тканей селезенки не должна превышать 2,2-2,4 r/êã (для человека 160-190 г).

Установив оптимально допустимую суммарную дозу биологического материала (гепэтоциты и спленоциты), мы перешли к определению оптимального соотношения активной массы криоконсервированных гепатоцитов и фрагментов ткани селезенки.

Эта работа проводилась на 26 беспородных кошках массой 2-3,5 кг с экспериментальным гепатитом, вызванным подкожным введением четыреххлористого углерода (0,2 мл 60%-ного раствора через день в течение

2-х недель).

В опытах использовали кошек, общий билирубин крови которых повышался с 0,70,8 мг% до 2,0-3,6 мг%. 8cего было поставлено четыре серии опытов. В I серии (5 кошек) животные не получали никакого лечения; во II серии (5 кошек) проводилась гемоперфузия через взвесь криоконсервированных клеток ксенопечени (доза 2,2 +

+ 0,2 г/кг); срок перфузии 3,5 .+ 0,2 ч; скорость перфузии — 30 мл/мин; в !!! серии— (5 кошек) проводилась гемоперфузия через фрагменты криоконсервированной ткани ксеноселезенки (доза 2,2 "-0,2 г/кг); срок перфузии 3,3 + 0,4 ч; скорость перфузии 2040 мл/мин; в И серии (5 кошек) — гемоперфузию проводили сначала через взвесь криоконсервированных клеток печени (доза

1,1 +. 0,1 г/кг) срок перфузии 1,5-2 ч, скорость перфуэии 20-40 мл/мин, а затем через фрагменты криоконсервированной ткани ксеноселеэенки (доза 1,1 +.0,1 г/кг); срок перфуэии 1,5-?,0 с, скорость перфузии 20-40 мл/мин; общая доза этих тканей составила

2,2 и 0,2 r/кг и соотношение их 1:1, О влиянии гемоперфузии на восстановительные процессы в патологически измененной печени судили по динамике изменения гистологической картины в печени на Б-й, 14-й и 30-й день после проведения гемоперфузии. Для этого проводили биопсию кусочков печени. Кусочки печени фиксировали в

10%-ном формалине. Готовили парафиновые срезы толщиной 5 мкм и окрашивали их гематоксилин-зозином, rIQ Шабадашу, крезиловым фиолетовым, проводили реакцию тетразониевого сочетания по Даниелли10

35

50

Пирсу, На гистологических препаратах с использованием окулярной сетки для стериометрических измерений площадь 0,25 мм в

50 полях зрения подсчитывали общее количество печеночных клеток с одновременным подсчетом количества нормальных гепатоцитов и гепатоцитов с признаками жировой и белковой дистрофии, общего количества печеночных ядер, нормальных и дегенерирующих.

Проведенные исследования показали. что у животных с экспериментальным гепа титом печень имела светло-коричневый цвет с хорошо выраженным рисунком долек, Микроскопически выявлялась выраженная жировая, зернистая, гидролическая и баллонная дистрофия гепатоцитов, полиморфизм печеночных клеток, их ядер, вакуолиэация ядер и пикноз. По ходу портальных трактов и около центральных вен отмечалась лимфоидная инфильтрация. Через 5 дней после гемоперфузии у всех животных

- печень имела более темный цвет, чем печень контрольных животных с токсическим гепатитом. Гепатоциты с белковой и жировой дистрофией в контроле составили

96,2 + 3,4%; в опытных группах их было достоверно меньше (табл. 5), однако разницы между II, III u IV группами не было. Количе ство дегенерирующих ядер в гепатоцитах печени кошек также достоверно снизилось к 5-м суткам по сравнению с контролем, однако достоверной разницы II, III u IV группами также не было выявлено (табл, 6). Через

14 дней после гемоперфузии выраженность дистрофического процесса во всех группах достоверно уменьшалась по Сравнению с контролем (табл, 5 и 6). В группе IV, где применялась для гемоперфузии комбинация гепатоцитов и спленоцитов 1:1, количество поврежденных клеток становилось достоверно меньше, чем во II и И! группах (р < 0,05).

В еще большей степени положительное влияние комбинации гепэтоцитов и спленоцитов проявляется через 1 месяц после гемоперфуэии: через 1 месяц содержание нормальных гепатоцитов в печени соответствует здоровым животным, тогда как в группах, где применяли либо гепатоциты (II гр.) либо спленоциты (III гр,) количество нормальных клеток вдвое меньше (табл. 5); содержание поврежденных ядер в гепатоцитах печени собак IV группы также близко к содержанию поврежденных ядер в печени здоровых собак (табл. 6). Таким образом, проведенные эксперименты показали, что и гепатоциты и спленоциты в неаллергизирующих дозах усиливают восстановительный процесс в поврежденной печени; они показали также, 1813453

40 дением.

55 что комбинацией гепатоцитов и спленоцитов в той же суммарной дозе можно способствовать достоверному усилению темпа регенерации печени и сокращению сроков завершения восстановительнОго процесса в ней..

Пример 5. Доказательства большей выраженности восстановительного процесса в печени у больных с поражением печени при комбинированном применении гепатоцитов и фрагментов ткачи селезенки при гемоперфузии.

Комбинированная гемоперфузия через криоконсервированные гепатоциты и фрагменты ткани селезенки проведена нами у 10 больных с хронической печеночной недостаточ н ост ь ю.

Результаты этих исследований представлены в табл. 7-9.

В табл. 7 представлены изменения некоторых показателей крови сразу после перфузии крови больного через изолированные гепатоциты и через гепатоциты в сочетании с фрагментами ткани селезенки, Иэ табл.7 видно, что существенные различия существуют в уровне лизоцима плазмы крови больных, который, как известно, выступает в роли гуморального регулятора регенериционных процессов в поврежденном органе (Бухарин О,В„Васильев А,В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине, Томск, 1974).

Снижение лизоцима в крови больных, которым проводилась перфузия через изолированные гепатоциты (Irp) и отсутствие снижения лизоцима в крови больных, которым дополнительно проводилась перфузия через ткань селезенки (llrp), свидетельствует, очевидно о том, что у больных I группы имеет место сорбция лиэоцима, а у больных

lI группы его секреция, балансирующая убыль этого вещества при сорбции его гепатоцитами.

В табл. 8 представлены результаты лечения печеночной недостаточности в течение 1 месяца после сеанса перфузии по способу-прототипу.

Из табл. 8 видно, что при подключении лишь одних гепатоцитов на 1-е сутки после подключения происходило достоверное увеличение общего и прямого билирубина и не достоверное повышение лизоцима, на

T-e сутки наступало достоверное снижение общего и прямого билирубина, огда как остальные показатели состояния печеночной функции и крови практически не изменялись (АлТ, АсТ, Ц.Ф., холестерин общий белок, у-глобулины, лимфоциты, моноциты, лизоцим).

На 30-е сутки. после подключения все показатели возвращались к исходному (патологическому) уровню, После подключения Иг в комбинации с фрагментами ткани селезенки (табл. 9) уже на 1-е сутки наступало снижение показателей общего и прямого билирубина крови больных на фоне достоверного повышения уровня лизоцима в плазме, на 3-и сутки снижение общего и прямого билирубина становилось достоверным; на 3-и сутки наступало также достоверное снижение Щ,Ф. с

4,1 +.0,2 до 2,8+ 0;5 ед 1 -глобулинов с

28,4 ч: 1,7% до 16,7 +. 1,12%, моноциты крови с8 +. 0,6% до 5 +4- 1,1%, лимфоциты крови а Ф вЂ” переносчики — регенерационной информации достоверно увеличились с 21 - 3,3% до 31 2,3% на фоне достоверного увеличения лизоцима крови. На 7-е и 30-е сутки положительная динамика усиливалась. либо поддерживалась на достоверно лучших цифрах по сравнению с прототипом. На 30-е сутки общий билирубин был ниже в 2 раза, прямой билирубин — более чем в 2 раза.

Имело место также достоверное снижение мочевины, Щ.Ф., у-глобулинов, моноцитов крови — косвенно характеризующих торможение неспецифического воспалительного процесса в стромальных структурах (печеночной ткани).

Предлагаемый способ позволяет достоверно снизить уровень связывания лизоцима во время перфуэии; интенсифицировать почти в 2 раза восстановительный процесс в печени без увеличения массы аллергезирующего материала; добиться более длительной компенсации функции печени при ее хроническом повреждении

Предлагаемый метод может найти применение при острой и хронической недостаточности печени, для устранения недостаточной функции печени при перитонитах, сепсисе и других состояниях, связанных с ее поврежФормула изобретения

Способ лечения больных с печеночной недостаточностью путем медикаментозной терапии и экстракорпоральной гемоперфузии через суспензию изолированных гепацитов, отл ича ю щий с ятем, что, с целью повышения эффективности способа, дополнительно проводят гемоперфузию через фрагменты ткани криоконсервированной селезенки, взятой в массовом соотношении к гепатоцитам 1:1 и в количестве 1,1 0,1

r/êr, при скорости перфуэии 20-40 мл/мин в течение 1,5-2,0 ч.

14

1813453

Таблица 1

С оки после по ключения ни) Показатель

Исход

О*

Общий билирубин, мк М/л

Прямой билирубин, мк М/л

АлТ/АсТ, ед, Мочевина, мМ/л

Холестерин, мМ/л

Лимфоциты, Моноциты, Щелочная фосфатаза, ед.

Общий белок, г/л

y — глобулин, Лизоцим, ед, 62,5

110,2

84,7

130,8

120,3

118,4

72,3

60/76

8,7

4,4

47,5

60/76

9,1

4,4

91,4

60/76

9,8

4,2

114,5

65/78

16.5

4,95

21

102

62/76

12.2

4,5

97

66/70

14,3

4,7

7 2,6

17,1

2,6

78

16,7

4,2

76

28,3

3,8

76

27

3,6

74

17,9

2,7

74

16

* 0 — сразу поссле подключения, Таблица 2

Выбор скорости гемоперфузии через фрагменты криоконсервироваиной ткани ксеноселезенки (в капельнице 15 г фрагментов ткани селезенки) Таблица 3

Определение длительности гемоперфузии через фрагменты криоконсервированной ткани ксейоселезенки (в капельнице 15 г фрагментов ткани селезенки) Динамика изменения показателей печеночной функции и некоторых показателей крови после экстракорпоральной гемоперфузии через взвесь изолированных гематоцитов и фрагменты ткани селезенки у больного Семенихина А.П, (и.б. N 683) 1813453

15

Таблица 4

* Достоверные изменения показателей по отношению к тем же показателям при массе селезеночной ткани 0,6-0,8 r/êã, Ъ

Таблица 5

Количество нармальных и поврежденных гепатоцитов в различные сроки после повреждения печени четыреххлористым углеродом (контроль, серия) и последующего проведения гемоперфузии; через гепатоциты (!! серия опытов), через фрагменты ткани селезенки (III серия опытов) и комбинацию этих тканей (1;1 (IV серия опытов), взятых одинаковым общим весом

* р < 0,05 по сравнению с контролем (! серия. опытов) .

** р < 0,05 по сравнению с il u III серией опытов, Влияние активной массы фрагментов ткани селезенки на изменение ректальной температуры собак и прирост антителообраэующих клеток (АОК) в селезенке мышей реципиентов в условиях адоптивного переноса

1813453

Таблица 6,Ь, Количество поврежденных ядер гепатоцитов (в f,) в различные сроки после повреждения печени четыреххлористым углеродом (контроль, серия) и последующего проведения гемоперфузии: через гепатоциты (II серия опытов), через фрагменты ткани селезенки (!!! серия опытов) и комбинацию этих тканей (1:1) (IV серия опытов), взятых одинаковым общим весом

* р < 0.05 по сравнению с контролем (! серия).

** р < 0,01 по сравнению с II и !!! серией опытов.

Таблица 7

Изменение некоторых показателей крови сразу после проведения гемоперфузии через изолированные гепатоциты (ИГ), а также через ИГ в сочетании с фрагментами ткани селезенки (ФТС) у больных печеночной недостаточностью

Примечание. — означает убыль вещества;

+ означает прирост вещества в крови.

Динамика восстановления функции печени и некоторых показателей крови у больных печеночной недостаточностью после экстракорпорального подключения изолированных гепатоцитов (и = 10) Таблица 8

Функциональный показатель

С оки после по ключения ни

Исход

Общий билирубин, мкМ/л

Прямой билирубин, мкМ/л

Мочевина, MM/л

АЛТ, ед.

АсТ. ед.

ЩФ. ед..

Холестерин, мМ/л

y — Глобулины, $

Общий белок, г/л

Лимфоциты, Моноциты, ф, 130,4»- 2,09

120,4 »- 4,2

21,2 1,65

82 +.3,8

64»-2,8

4,7 ":0,8

6,3 +1,1

19,1 ++ 3,2

78» 2,2

27»-3

10 «+0,6

153,6 = 2,6*

132,8 + 4,6»

19,3 »- 1,6

84+ 4,6

66+ 8,3

6+ 1;35

4.9 0,8

17,0 й2 1

70 +3,1

29 +2,6

9 » 0,8

138,5 + 3,7

125,3 »- 6,06

19,3»-1,4

82 3,1

63 6.7

5,6 0,8

4,6 ":0,57

16,8+ 2,2

70» 3.4

30» 2,1

7 » 0,7

115,3 - 4,9*

109,9 »- 4,2*

182»-1 52

80»-3,2

60+ 2,8

4,4 » 0,7

4,9 + 0,9

16 ":1,8

72 +2,8

31 2,7

7» 0,8

126,5 »- 5,4

116 + 4,6

17,5 »- 0,65

80 4,2

60 й7,8

4,8 »- 1,2

6,1 »- 0,8

15,8 й41

76+ 4,1

29+ 2,8

9 й1,2

1813453

19

Продолжение табл, 8

С оки после по ключения ни) Исход

Функциональный показатель

25 3 «- 1 5 19 8 «1,7 25 5 + 2 1 28 8 + 1 6

24+2

Лизо им е плазмы

*р < 0,05.

Таблица 9

Динамика восстановления функции печени и некоторых показателей крови у больных печеночной недостаточностью после экстракорпорального подключения гепатоцитов и фрагмен- ° тов ткани селезенки (n = 10) С оки после по ключения ни

Исход

Функциональный показатель

* р < 0,05 по сравнению с исходом.

Составитель Н.Онищенко б

Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Редактор

Заказ 1796 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Общий билирубин, мкМ/л

Прямой билирубин, мкМ/л

Мочевина, мМ/n

АЛТ, ед.

Аст, ед.

ЩФ, ед.

Холестерин, мМ/л

p — Глобулин, Я, Общий белок, г/л

Лимфоциты, %

Моноциты, Лизоцим (ед) (плазмы) 130 «+3,3

114 «4,2

16,5 2,7

65+31

78 = -5,2

4,1 +.0,2

4,8 +.0,7

28,4+ 1,7

76» 2,3

21+ 3,3

8 ":0,5

23 +1,6

118+ 7,8

101 +. 5,8

12,2 «1,7

62+ 2,5

76 «4,4

3,6 +. 1,2

4,4 +-0,3

17,3 + 2,3*

74 «37

28 +3,5

6,8 + 0,8

29,4 + 1,8*

110 + 5,9*

91,3 «4,2*

9,8 + 2,5

60 +. 1,7

74,9 5,5

2.8 +. 0,5*

4 3 «045

16,7 «- 1,12*

74 «48

31 «2,3*

5 «1,1+

34,9 «1,4*

84 ++ 5,7*

71 + 5,8*

8,7 «2,3*

60 «1,3

74 + 4,7

2,6+ 0,9*

4,4 - 0,5

16,2 + 1,7*

78 +3,7

35 + 2,1*

5 «1,6*

42,1 «1,8*

62 +2,3*

48,5 + 5,2*

9,1 «О 7*

57 +1,6

70+ 3,1

2,6 + 0,7*

4,4 0,8

16,9 +0,9*

78+ 2,9

35 «3.8+

4.9-+ 0,3*

36,9 + 27*