Способ регулирования половой деятельности млекопитающих

 

спгоз советских

СОЦИАЛ ИСЛГИЧЕ СКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 37/02

ННОЕ ПАТЕНТНОЕ сср

ССР) АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

1) 4027844/15

2) 18.07.86

6) 30,08,93. Бюл. N 32

1)2763/85

32) 18.07.85 . 33) HU

1) Иннофинанце Алталанош Инновациош ензинтезет (HU)

72) Чаба Банхази, Золтан Граф, Анико Хорат, Дьердь Кери, Эстер Коватш и Иштван еплан (HU)

56) Патент США ЬЬ 4410514, л, Е 07 С 103/52, 1983 г.

54) СПОСОБ РЕГУЛИРОВАНИЯ ПОЛОВОЙ

ЕЯТЕЛЬНОСТИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

57) Использование: в животноводстве, а менно в регулировании половой деятельИзобретение относится к области живоноводства, а именно к регулированию поовой деятельности млекопитающих.

Цель изобретения — повышение эффективности способа.

Пример 1, Провоцирование супаровуляции в инфантильных крысах женской особи.

60 штук инфантильных самок крыс в возрасте 21 день, весом 7 — 8, граммов внутрибрюшинно были подвергнуты обработке препаратом D— - Phe; Glo -GnRH, растворен6 8 ном в физиологическом растворе поваренной соли. В зависимости от вида обработки животные были разделены на несколько групп. В серии обработок, продолжавшихся от одного дня и до 8 дней, отпускали предварительные дозы порядка 1rg в день или дважды в день.

После завершения обработок всех жи-! вотных умертвляли эфирным паром, их яич„„Я „„1837888 А3 ности млекопитающих; Сущность изобретения: животным в качестве соединений Gn

RH-типа вводят полипептид ylp-His — Trp—

Ser — Tyr Х1 — Х2 — Хэ — Pro-X4 где Xi — D — phe, Х2 — Trp или Leu, Хз — Leu или 61п, Х4 — Gly — NH2 или NH Ет. Препарат вводят в количестве

0,01 — 500 мг/кг с кратностью введения 1 — 25 раэ и с интервалом введения 2 ч 7 дней, Способ позволяет провоцировать суперовуляцию у инфантильных животных, провоцировать сперматогенеэ у животных, находящихся в состоянии олигоспермии, обусловленной сезоно, стимулировать функции яичников у инфантильных животных и вне сезона, а также получать яйцеклетки животных с целью выращивания эмбрионов в лабораторных условиях. ники в результате операции были изьяты после наступления смерти, 24 часа спустя после последней обработки. Анализ осуществлялся визуально и на основе гистологических проб. В яичниках контрольных животных было найдено множество фолликул, находящихся в развитии, однако ни один фолликул не достиг размера фолликула

Граф а, не было также ни желтых тел, ни

Corpus haemorrhagicum. В противоположность, этому, во всех обработанных группах можно было обнаружить гормональное действие, которое сказывалось в росте фолликул, в преобразовании в фолликулы Граф а, в овуляции больших фалликул и в образовании нормальных желтых тел. Яйцевод и матка были также увеличены. Иэ 60 обработанных животных всего 4 не показали реакции на обработку. У животных, которые в течение 4 дней ежедневно получали дважды дозу в количестве 2 мкг аналога GnRH и на

1837888

4-й день были подвергнуты обработке в течение 6 часов дозой в количестве 10 мкг после того, как они получили дозу 2 мкг, в яичниках были в большом количестве размягченные фолликулы Граф а, находящиеся непосредственно перед овуляцией. Число окончательно созревших фалликул Граф а в день находилось в пределах между 60 и 90, в то.время как в случае выросших животных нормальная величина составляла 12. Вторую группу животных обрабатывали подобным же образом, с тем отличием, что обработка продолжалась свыше 6 дней. В случае этой группы эффективность суперовуляции оценивали по числу нормальных желтых тел, появившихся в яичниках. Аналогично результатам, описанным подробно выше, количество желтых тел на каждое животное в день здесь также находилось в пределах между 60 и 90, Гистологический анализ подтвердил этот результат в достаточно полной мере.

Пример 2. Провоцирование суперавуляции на инфантильных самках мышей, Аналогичным образом, как это описано в примере 1, были подвергнуты обработке в общем 105 самок мышей, которые имели возраст 28 дней и вес 5-6 r. Животные, обрабатываемые в течение 1 — 8 дней, ежедневна получали 1 — 5 rg D-Phe, Gln, Gly oGnRH-этиламида. Между отдельными обработками интервал составлял 4 часа.

Яичники были удалены через 27 часов после последней инъекции.

Яичники контрольной группы имели матово-желтый цвет и гомогенную структуру, в некоторых яичниках находились 1 — 2 растущих фолликул. В группах обработанных животных на всех яичниках, увеличенных яйцеводах и матке можно было наблюдать действие гормона, У животных, которые ежедневно адин раз получали дозу 1rg, а на

3-й день, через четыре часа после получения дозы 1 мкг названного аналога GnRH, в яичниках были обнаружены окончательно созревшие, нащупываемые волнистые фолликулы Граф а, а именно, на каждое животное па 45-70 штук. В группе, которую обрабатывали аналогичным образом, но в течение 5 дней, на месте фолликул Граф а образовались нормальные желтые тела в вышеназванном количестве, Результат гистологического исследования соответствовал визуальной оценке.

Эти результаты явились подтверждением результатов способа согласно примеру 1.

Пример 3. Провоцирование суперовуляции на инфантильных кроликов, 20 молодых кроликов породы "белый жемчуг", родившихся в условиях массового

55 содержания, в возрасте 42 дней подвергались обработке в течение 3 дней ежедневно дважды внутрибрюшинна, каждый соответственно 5 мкг D — Phe, Gln — GnRH, Затем животных разделили на две группы, Первую группу на 4-й день обработали биологически активным веществом в количестве 50 мкг, другую группу умергвили с помощью эфирного пара. Число зрелых фолликул Граф а в группе. умертвленной до обработки, служило в качестве кантрсля при установлении изменения, насступившего вследствие дозы

50 мкг, У оставшихся в живых животных наступление овуляции прослеживали на двух животных в результате лапароскопического исследования (отражение брюшной полости), осуществляемого в течение 10 часов, под наркозом. Обработка посредством

50 мкг через 26 часов привела к тому, что у каждого животного отмечалось 30 — 45 овуляций или Corpus haemorrhagicum в то время как яичники контрольных животных были не активны, Посредством этага способа уже из инфантильных экземпляров кроликов можно было получить зрелые яйцеклетки и увеличить их число в расчете на физиологическую величину, Пример 4. Провоцирование суперовуляции на инфантильных свиньях.

20 инфантильных самок поросят, в возрасте 100 дней подвергались обработке в течение 6 дней ежедневно, дважды внутримышечно посредством соответственно 10 мкг

0 — Phe, Gin — GnRH. Для анализа из конт6 рольных животных удалили соответственно яичник, методики исследования соответствовали методикам, описанным в примере 3, число образованных фолликул Граф а сравнивалось с числом желтых тел, образованных после овуляции. Наступление овуляции наблюдали с помощью лапароскопа. Дозы, отпущенные на 7-й день, в количестве

100 мкг D — Phe, Gin — GnRH через 41 час вызвали у 10 поросят, подвергнутых обработке 15 — 36 овуляций. Обработка инфантильных поросят привела к такому же результату, как и в случае видов животных, названных в примерах 1 — 3.

Пример 5. Провоцирование суперовуляций на инфантильных овцах.

10 ягнят женских особей, в возрасте 50 дней,в течение 5 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно препаратом

D-Phe, Gin, Gly -GnRH-зтиламидов в кав о личестве 10 мкг. Дозас биологически активного вещества в количестве 70 мкг, отпущенная на 6-й день, вызвала у каждого животного 3-9 овуляций. У контрольных животных не наступило никакого изменения.

1837888

А и с б ализ осуществлялся как нэ обработанных ж ватных,так и на контрольных животных средством лапароскопии, Эти результаты ответствовали тем результатам, которые ли описаны в примерах 1 — 3.

Пример 6. Провоцирование суперуляции на инфантильном крупном рогам скоте.

8 инфантильных телят, в возрасте 65 ей, были подвергнуты обработке ежед евно в течение 8 дней посредством и епарата Р-Phe6, Gin, Gly — GnRH-этила о м да в количестве 2 мкг. После одного дня и рерыва, на 10-й день животным внутриышечна вводили 100 го биологически акт вного вещества. После последней и ъекции были удалены оба яичника; в обем, в каждом яичнике были найдены приерно 5-11 развитых фолликул Граф а. оловина этих фолликул не нащупывалась льше как твердые, следовательно, они нах дились непосредственно перед овуляией.

Этот эксперимент доказывает, что в случ е крупного рогатого скота уже из инфанильных животных можно получить есколько зрелых яйцеклеток, в то время ак взрослое животное овулирует обычно ишь одну яйцеклетку.

Пример 7. Провоцирование спермаогенеза у зубра, олигоспермического следствие сезонного периода, с целью олучения эякулятэ. пригодного для искуственного охлаждения и для хранения в усовиях глубокого охлаждения.

От зубра, находящегося е зоологичеком саду, весом около 700 кг, в мае месяе была взята под наркозом проба спермы лектрическим способом. Было установено, что вол находился в состоянии олиоспермии, обусловленной сезоном. имптомы были следующие: в поле зрения икроскапэ, обычно используемого для иследования спермы, с 1 500-кратным увелиением, число сперматозоидов было 5-20, одержание дефектных сперматозоидов сотавляло 75 — 80%, а плотность спермы — 0,5. перма такого качества непригодна для оподотворения, Животное было подвергнуто обработке посредством инъекционного прибора, раотэющего на сжатом воздухе), дважды в еделю препаратом D — Phe,Gln -GnRH в оличестве соответственно 200 мкг. На 55-й ень обработки это животное дважды, с инервэлом в один чэс, доводили до семяизержения. Оба эякулята были саед .нены вместе; платность составляла 4, подвижность 55%. Сперма была подвержена глубокому охлаждению, а затем в результате

50 дегенерированных сперматозоидов превышало 40%. Дефектные формы были в основном формы мужских особей (капли плазмы на средней части шейного отдела). На 7-й неделе после начала обработки под наркозом снова собрали эякулат. От всех животных можно было успешно взять сперму, объем зякулата составлял порядка 1,2 мл и

3,1 MR, плотность находилась в пределах 3, подвижность -65%, численно значительно превышалэ физиологическую величину. глубокого охлаждения определяли наступившее снижение подвижности, Оно составляло лишь 5%.

С помощью этого способа удалось ока5 зывать влияние на сперматогенез племенного животного таким образом, чтобы вместо эякулата, непригодного для оплодотворения, можно было получить сперму хорошего качества, пригодную как в свежем

10 состоянии, так и после хранения в условиях низкой температуры для оплодотворения нескольких коров (всего 14).

Пример 8. Провоцирование сперматогенеза у красных (рыжих) лис, находя15 щихся в состоянии олигоспермии, обусловленной сезоном (vulpes vulpes).

На сперматогенез рыжих лис, содержащихся в зверинцах (охотничьих угодьях), которые находились в олигоспермическом

20 состоянии, обусловленном сезоном, оказывали влияние с той целью, чтобы обеспечить искусственное оплодотворение черно-бурых лис и голубых песцов, содержащихся в случном пункте, для того, чтобы получить

25 особые и высококачественные гибридные меха, Из специальной литературы известно, что все подвиды лис лишь один рэз в год находятся в состоянии течки, и кроме одного этого периода половые железы обоих по30 лос являются полностью неактивными.

Между течкой отдельных подвидов существует разница во времени порядка нескольких месяцев (рыжая лиса: январь; голубой песец: апрель до мая). Результаты исследо35 ваний сравнивали с изображением спермы популяции, находящейся в сезонной течке, у которой среднее количество эякулата составляло 2 мл, плотность 3, а подвижность

50 — 60%. Это рассматривали как физиологи40 ческую величину.

Пять половозрелых самцов рыжих лис, весом в среднем 8 кг, обрабатывали, начиная с апреля, в течение 7 недель, дважды в неделю, посредством препарата О-Рпе, 45 61п -GnRH в количестве 1, 5, 10, 50 мкг. На

3-й неделе после начала обработки были изъяты пробы спермы, B этих пробах число сперматозоидов составляло примерно

60-70% физиологической величины, число

1837888

15

20 (Самцы к этому моменту были отделены от самок, для опорожнения посредством копуляции не было возможности), Пробы спермы в зависимости от качества были разделены на группы и охлаждены в условиях низкой температуры, После разведения и глубокого охлаждения, а затем после оттаивания (размораживания) подвижность спермы, охлажденной до -196 С, составляла 45 g,. При применении спермы, подвергнутой глубокому охлаждению, можно было — при использовании программирования GnRH (см.пример 17) и техники искусственного оплодотворения — обеспечить нормальную беременность у голубых песцов.

В результате однократного отбора эякулата, производимого у пяти лис, можно было получить 56 доэ спермы, пригодной для оплодотворения. Такая техника приемлема для получения ценных мехов на крупных фермах.

Пример 9. Стимулирование физиологической нормоспермии на бенгальском тигре для получения гиперспермии, позволяющей глубокое охлаждение.

Бенгальский тигр, находящийся во владении зоопарка, в возрасте 8 лет, имеющий вес около 200 кг, регулярно спаривался, его самка прежде каждый год была беременной. Зная об этом, от тигра под наркозом электрическим путем в период спаривания была взята проба спермы. Было установлено, что плотность спермы составляла 3, подвижность 30, а количество эякулата

0,2мл, Эякулат показывал картину физиологической нормоспермии. Такое небольшое количество эякулата нельзя было подвергать глубокому охлаждению по техническим причинам. Для того, чтобы избежать повреждения печени, наркоз можно осуществлять максимально через каждые 4 дня и поддерживать максимально в течение 4 — 5 часов. Такой способ сбора спермы является неприемлемым.

Самца закрыли в отдельную клетку и в течение 12 дней ежедневно обрабатывали препаратом этиламида в количестве 10 мкг.

Это биологически активное вещество было растворено в 1 мл физиологического раствора поваренной соли. и его применяли внутримышечно посредством прибора для инъекций, работающего, на сжатом воздухе.

На 12-й день это животное под наркозом, электрическим путем, дважды, с интервалом в один час, было доведено до семяизвержения, при этом было получено 1 мл или

0,8 мл спермы. Плотность соединенных проб составляла 4, подвижность находилась в пределах 70 . Пробы спермы были охлаждены в условиях низкой температуры и раз25

55 делены на 21 отдельные дозы для искусственного оплодотворения, После размораживания спермы подвижность составляла

Таким образом, от бенгальского тигра можно было получить в достаточном количестве сперму, подлежащую хранению в банке

CllePMbl.

Пример 10. Яичниковое торможение на львах с целью контрацептэции. .В зверинцах всего мира среди крупных жищных животных показывают льва. Для различных панорам и Safari-парков требуется оба пола показывать одновременно, в одном и том же жизненном пространстве.

Среди крупных хищных животных лев является единственным, который хорошо размножается в неволе при достаточно хорошем питании, Вследствие абсолютного насыщения "рынка львов" желательным является разработка способа предупреждения от беременности, который будет безопасным для животного, не будет вызывать никаких изменений в его внешнем виде и его поведении, и несмотря на спаривание, способствующее появлению потомства, предупреждать беременность, Предохранение от беременности на основе сексуальных стероидов приводит к болезненному ожирению и к потере демонстрационного значения животного, Интактная плодовитая львица, находящаяся во владении зоопарка, весом около

200 кг, которая уже пять раз приносила приплод, каждые три недели была подвергнута обработке дважды посредством 0Phe .Gin -GnRH, а именно сначала в количе6 8 стве 50 мкг, через 4 часа — в количестве 500 мкг, а затем была выдержана пауза в три недели. Такая обработка, продолжающаяся каждые три недели, осуществлялась от начала течки до 50-го дня после окончания момента течки, характерного для этого вида (то есть от апреля до августа). У животного было нормальное поведение, и оно спаривалось регулярно, данный самец, согласно исследованию, был нормоспермический, Львица в течение периода обработки не была беременной, и ни в ее поведении, ни в ее внешнем виде не наблюдалось отклонения от нормы, Пример 11. Индуцирование половой деятельности подсвинок женских особей на откорме. находящихся в условиях массового содержания в половом созревании, с целью первичного стимулирования состояния, готового для зачатия, B условиях массового содержания отмечается стремление к тому, чтобы животных, предусмотренных для сохранения пого1837888 и т т и м р т

У с с и м ц и о р с с уу р з и к 9 в о со в б и р в ф с л м r е н о в з ч р 3

r y о и и е и с р о и д и у и кз с у з ч м н

В этой серии опытов цель не распростнялась на точное установление момента уляции, потому что не имелось в распорянии достаточного количества племенных яков. Поэтому цель состояла в том, чтобы ервое успешное состояние, способное к чатию", было обеспечено в течение 26 ей. Содержание 10 беременных живоых в контрольной группе соответствовало едней производственной величине. Поэму увеличение на 60, появившееся в реP о ж х

I з д т с т вья, племенных, как можно быстрее исльзовать для разведения, а также синхроировать для оплодотворения и огюроса в

3» ересах приспособления к непрерывной нологии, Активность половых, желез 5 дсвинок женскйх особей, находящихся на ссовом содержании и расположенные в зультате интенсивного кормления к бысому росту, в препубертанный период и в риод полового созревания является не- 10 тойчивой (лабильной), поэтому встречаетредко и рассеянно по всей популяции,— стояние, собственно, готовое к зачатию следовательно позднее от одной берен ности. 15

Для цели эксперимента на одной стэнпо выращиванию молодняка подсвинок

200 будущих свиноматок. имеющихся в поряжении. были выбраны 60 животных— четом наилучшего развития, самой луч- 20 и способности оценки кормов. Их иногда деляли на две группы, соответственно, 30 животных. Обе группы животных не мили, ни поили втечение24часов, также ответствии с технологией, имеющей ме- 25 на этой станции. Животных к моменту их ора внутримышечно обрабатывали преатом D Phe,G(n -GnRH, растворенным

6 8 изиологическом растворе поваренной и, Инъекции с дозами соответственно 20 30 названного соединения повторялись е дважды с интервалом 24 часа. Как в бработанной контрольной группе, так и бработанной группе состояние, готовое к атию, наступило у первого животного че- 35

5 дней после выбора животных. Обе ппы содержались в одном помещении, в наковом жизненном пространстве, при нтичных условиях в течение 26 дней, докаемых технологией, В течение этого пе- 40 да из контрольной группы, которую не вергали обработке, 3 животных (10, а обработанной группы 21 животное (70 ) ешно достигли состояния, способного ачатию. Успешными считались лишь те 45 чаи, в которых состояние, способное к атию, последовало от нормальной берености и родов. зультате обработки, означает существенный экономический эффект.

Пример 12, Устранение отсутствия течки, обусловленной сезоном, у взрослых лесных котов (РеИз silocstris).

Две самки лесных котов, находящихся во владении зверинца, имеющие средний вес 6 кг, цикл которых при естественных условиях приходится на месяцы февраль/март, подвергали обработке в августе посредством 0 — Phe,GÜ, препарата Gly

6 8 ю

GnRH-этиламида, Перед обработкой для проверки состояния обоих яичников под наркозом была открыта брюшная полость.

После того, как брюшную полость снова зашили, животных, при выдерживании паузы в два дня, в общем четыре раза обрабатывали биологически активным веществом, который применяли внутримышечно, растворенным в физиологическом растворе поваренной соли. Между первой и второй инъекцией выдерживали паузу в два часа; первая доза составляла 100 мкг, вторая

500 мкг.Через 48 часов последовала третья доза — 100 мкг, а еще через следующие два часа — четвертая доза (500 мкг). На О-й, 2-й, 4-й и 8-й день под наркозом вскрыли брюшную полость, изменение состояния яичников оценивали визуально. После завершения обработки. оба яичника были удалены в результате операции, зафиксированы и подвергнуты гистологическому анализу.

На 0-й день в случае обоих животных в левом яичнике можно было увидеть 3 — 4 предполагаемые вторичные фолликулы, оставшееся старое желтое тело, и в правом яичнике 5 — 6 предполагаемых вторичныхфолликул, В результате обработки через 4 дня все вторичные фолликулы развились, превратившись в фолликулы Граф а, состоялась овуляция, а на месте фолликулы находились Corpora haemorrhagica, на пути превращения в желтое тело. Наряду с

Corpora haemorrhagica росли в визуально не учитываемом коли .. стве вторичнЫе фолликулы, которые в результате воздействия вторичной обработки продолжали развиваться, а после применения последней дозы в количестве 500 мкг были атретизированы посредством интрафолликулярной лютеинизации. Визуальные доказательства в полном объеме были подтверждены гистологическим анализом.

Овуляция, наступившая в результате описанной обработки, доказывает, что у вида кошачьих можно достичь оплодотворения также и вне сезона, и вне естественном содержании также можно обеспечить получение потомства, 1837888

Пример 13, Обработка самки голубого песца, находящегося в периоде отсутствия течки, обусловленной сезоном, с целью стимулирования течки, обеспечивающей получение потомства.

Самка голубого песца, находящаяся в периоде отсутствия течки, обусловленной сезоном, была подвергнута исследованию в декабре, под наркозом, посредством лапароскопа. Было установлено, что оба яичника были неактивными и не содержали развивающихся фолликул или фолликул Граф а, Это животное в течение 10 дней ежедневно обрабатывали дважды внутримышечно посредством О-Phe, Gln -GnRH в е в количестве 1-5 мкг. На 10-й день под наркозом снова повторили лапароскопическое исследование, В обоих яичниках находились большие желтые тела, число которых— вследствие недостаточности технических возможностей можно было оценивать лишь приблизительно — составляло 10-20, Одновременно было установлено, что шейка матки была открыта.

Точнотакже aдекабре подвергали обработке самку, которую вследствие грудной атрофии нужно было исключить из числа выращиваемых животных; обработку осуществляли аналогичным образом, ежедневно дважды посредством соответственно 2 мкг препарата О-Phe, Gln -GnRH. Дейсте 8 вие обработки прослеживали по изменению состояния шейки матки. На 6-й день после переоА обработки шейка матки открылась.

Потом была отпущена доза в количестве 50 мкг. Через 16 часов состояние яичников исследовали посредством отражения; овуляция предстояла непосредственно. Теперь брюшную полость полностью открыли, яичники были удалены в ходе операции, а из общего количества 11 фолликул Граф а яйцеклетки были удалены в результате пункции. Было найдено 6 нормальных яйцеклеток, покрытых нормальной.

С помощью этого способа было обеспечено получение яйцеклеток, пригодных к оплодотворению в лабораторных условиях, эмбрионов в период отсутствия течки в половом цикле, обусловленного сезоном, беэ нарушения нормзльного годового цикла, Это позволяет получать особое гибридное потомство при использовании менее ценных животных — реципиентов.

П р и м в р 14. Стимулирование функции яичников инфантильных домашних кошек (FeIIs cattus dofnestlcus) посредством OPhe,GInР-GnRH.

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, вес которых составлял примерно 0,3 кг, были подвергнуты обработке, через интервал в два дня, четыре раза посредством препарата Π— Phe,GIn -GnRH в количестве, oоответe 8 ственно, 100 мкг. Биологически активное вещество было растворено в фиэиологиче5 ском растворе поваренной соли и применялось внутримышечно. После окончания обработки под наркозом оперативным путем удалены оба яичника и подвергнуты визуальному анализу, Затем яичники

10 фиксировали в формалине и подвергали гистологическим исследованиям. В обоих яичниках имелось 5 — 7 штук Corpus паегпоггзфсот. Под корой были найдены хорошо отделяемые от светлого цвета сливоч15 ного масла, яичника, находившиеся в развитии фолликулы, некоторые из них имели размер фолликул Граф а, Эти результаты однозначно свидетельствуют о том, что яичник еще инфантильных

20 домашних кошек в результате действия описанного способа обладает гистологическими и морфологическими свойствами, характерными для половозрелых животных, Таким образом, животное перед биологиче25 ской половой зрелостью, понимаемой в обычном смысле, становится пригодным для того, чтобы получить (от него) яйцеклетки, способные к оплодотворению In vitro (в лабораторных условиях), 30 Пример 15. Стимулирование функции яичников инфантильных домашних кошек посредством О-Phe, Тгр, Ieu — GnRH, 5 молодых кошек в возрасте 45 дней, имеющих вес около 0,3 кг, были обработаны

35 с помощью препарата D — Phe, Trp, Leu— е 8

GnRH, Перед обработкой левый яичник был удален оперативным путем. Животным через интервал в 2 дня в общем трижды отпускали дозы соответственно 100 мкг в виде

40 раствора, приготовленного в физиологическом растворе поваренной соли; дозы вводили внутримышечно. После завершения обработки был удален в результате операции оставшийся (правый) яичник, подверг45 нут визуальному анализу, а после фиксирования — гистологическим исследованиям.

Перед обработкой яичники, удаленные оперативным путем, были полностью гомо50 генные и имели цвет сливочного масла, развивающиеся фолликулы было невозможно заметить в них ни визуально, ни в результате гистологического исследования. После обработки в яичниках были найдены 7-8

55 штук Corpus haernorrhaglcum и много (не поддающиеся учету) фолликул, находящихся в развитии.

Этот результат подтвердили данные, полученные согласно примеру 14, в полной мере также и для другого аналога гормона, 1837888

Составитель А, Филиппова

Техред M,Ìîðãåíòàë КоРРектоР Н, Кешеля ор

2879 Тираж Подписное

1ИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушскэя наб., 4/5 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 и пособствовал углублению практических зн ний относительно физиологии следующ го цикла яичников.

Пример 16. Стимулирование приморд альных (первичных) фолликул инфантиль- 5 ных домашних кошек. женских особей, (Felis с tus domestlcum).

5 молодых кошек в возрасте 45 дней, к торые имели вес приблизительно 0,3 кг к ждая, обрабатывали посредством D — 10

P е, Gin -GnRH. Перед обработкой под н ркозом был оперативным путем удален л вый яичник. Затем эти животные в течен е 3-х дней, ежедневно, три раза через и тервалы s 4 часа, в общем девять раз, 15 и лучали соответственно 0,1 мкг биологичес и активное вещество, внутримышечно, в в де суспензии, приготовленной с физиол гическим раствором поваренной соли и и опиленгликоля. После завершения абра- 20 б тки оставшийся яичник был удален операт вным путем, подвергнут визуальному а ализу, à после фиксации — гистологичес им исследованиям, Визуально оба яичник были гомогенны, и имели цветсливочного 25 м сла, обработанный яичник был несколько б льше. В необработанных яичниках гистол гически можно было воспринять только л шь примордиальные фолликулы, в то врем как на поверхности разреза обработан- 30 н ix яичников было зарегистрировано н исчислимое количество (несколько сотен) н ходящихся в развитии фолликул, показыв ющих различные стадии образования ант ума. 35

С помощью этого способа удалось обеси чить одновременную стимуляцию нес ольких сотен примордиальных фолликул я чника, Пример 21, Получение яйцеклеток 40 к упного рогатого скота с целью выращиван я эмбрионов в лабораторных условиях (in ч tro) из культуры органа post mortum.

Из животных, 30-55 минут спустя после того, как их убили и обескровили на бойне, были удалены интактные (неповрежденные) яичники, и в лабораторных условиях уложили в комплексный Adjuvant.

К питательной жидкости в концентрации 10 до 10 г/мл добавили D — Phe, Gin, -9 -9 6 В препарата Gly10 — GnRH-этиламида. Яичники, выдерживаемые в культуре органа, овулировали в течение 16-43 часов, Из яйцеклеток, полученных из яичников в результате in vitro спонтанно осуществляемых овуляций и последующей пункции, 85% были способны для продолжения мейоза (восстановительного деления клетки), и их можно было успешно оплодотворять посредством хранимой спермы крупного рогатого скота in vitro, Первые два .деления клетки оплодотворенных ln vltfо яйцеклеток можно было наблюдать в культуре.

С помощью этого способа была создана воэможность так же, как и при распространенной в мире технологии искусственного оплодотворения у крупного рогатого скота, "искусственно оплодотворять" непосредственно живые эмбрионы, то есть трансплантировать. На бойнях имеется возможность получения такого количества эмбрионов, которое в значительной мере превышает потребность.

Формула изобретения

Способ регулирования половой деятельности млекопитающих путем введения соединений ОпЯН-типа, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения эффективности способа, в качестве соединений

GnRH-типа используют полипептид ylp—

His — Тгр — Ser — Tyr — Х1 — Xz — Хз — Pro — Х4, где X1—

D — Phe; Xz — Trp или Leu; Хз — Leu или Gin;

Х4 Giy — ЙН2 или -КН Et, (который вводят в количестве 0,01 — 500 мг/кг с кратностью введения 1 — 25 раз и с интервалом введения 2 ч — 7 дней,