Штамм вируса гриппа а (н3 n 2) для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для детей

 

Использование: медицинская вирусология . Сущность изобретения: вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) - рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (H3N2) с холодадаптированным температурочувствительным вирусом А(Ленинград) 134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и деИзобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического вируса. Изобретение целесообразно использовать в здравоохранении для профилактики-гриппа среди детей живой интраназальной вакциной из штамма А(Закарпатье) 354/89/6 Р (H3N2). Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакционного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (H3N2). тей, свойства которого дают возможность гарантированно получать рекомбинантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А(3акар- .патье) 354/89/6Р активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32-34°С), разность в показателях инфекционной активности при 32°С и 40°С - 7,75 Ig ЭЙД 50/0,2 мл. Рекомбинантунаследовал от эпидемического вируса 2 гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и 6 генов, кодирующих негликозилированные белки - от донора аттенуации . По данным рекомбинационного анализа в геноме рекомбинанта имеется 5х8-мутаций, характерных для донора аттенуации вируса А(Ленинград) 134/47/57, на личие которых коррелирует с атеннуацией вируса для человека. Штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) ареактогенен для детей 3-15 лет при интраназальном введении и вызывает сероконверсии у 70,3% привитых с исходным титром антител 1:8. 2 табл. Вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) получен методом рекомбинации эпидемического вируса А(3акарпатье)354/89 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А(Ленинград) 134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации (разность титров при 32°С и 40°С - 7,0 Ig ЭЙД 50/0,2 мл) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки А(Ленинград) 134/47/47 (H2N2). Методом РНК:РНК гибридизации с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле выявлено, что вакцинный 1 ел С 00 Сл 00 е 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 5025979/13 (22) 27.12.91 (46) 30.08.93, Бюл. ¹ 32 (72) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АМН СССР (72) М.И. Гущина, Л.М. Гармашова, Г.И.Александрова и Л,Г. Руденко (73) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АН СССР (56) Авторское свидетельство СССР № 1655985, кл. С 12 N 7/00, 1989. (54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А (НЗЛЙ)

ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ

ДЕТЕЙ (57) Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2)— рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А(Закарпатье)

354/89 (H3N2) с холодадаптированным температурочувствительным вирусом А(Ленинград) 134/47/57 (H2N2) — донором аттенуации, безвредным для взрослых и деИзобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического вируса.

Изобретение целесообразно использовать в здравоохранении для профилактики-гриппа среди детей живой интраназальной вак ци ной из штамма А(Закарпатье) 354/89/6 P (H3N2).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакционного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (H3N2), „„5U „„1838404 АЗ (я)л С 12 N 7/00, А 61 К 39/145 тей, свойства которого дают воэможность гарантированно получать рекомбинантные . вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А(Закар.патье) 354/89/6Р активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32-34 С), разность в показателях инфекционной активности при 32 С и 40 С вЂ” 7,75 Ig ЭИД 50/0,2 мл.

Рекомбинантунаследовал от эпидемического вируса 2 гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и 6 генов, кодирующих негликозилированные белки — от донора аттенуации. По данным рекомбинационного анализа в геноме рекомбинанта имеется аз-мутаций, характерных для донора аттенуации вируса А(Ленинград) 134/47/57, наличие которых коррелирует с атеннуацией вируса для человека. Штамм А(Закарпатье)

354/89/6Р (H3N2) ареактогенен для детей

3-15 лет при интраназальном введении и вызывает сероконверсии у 70,3 привитых с исходным титром антител 1:8, 2 табл.

Вакцинный штамм А(Закарпатье)

354/89/6Р (H3N2) получен методом рекомбинации эпидемического вируса А(Закари ать е) 354/89 (H3 N2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А(Ленинград)

134/47/57 (H2N2) — донором аттенуации (разность титров при 32 С и 40 С вЂ” 7,0 Ig

ЭИД 50/0,2 мл) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки А(Ленинград)

134/47/47 (H2N2).

Методом РНК:РНК гибридизации с последующим электрофореэом в полиакриламидном геле выявлено, что вакцинный

1838404

Таблица 1

Реактогенные свойства вэкцинного штамма А(Закарпатье) 354/89/6Р (НЗМ2) 6 С штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р унаследовал от донора аттенуации гены 1, 2, 3, 5, 7, 8, кодирующие белки РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS, соответственно и 4 и 6 гены, кодируюЩие поверхностные антигены (гемагглютинин и нейраминидазу) от эпидемического вируса. Температурочувствительный (разность титров при 32 и 40 С вЂ” 7,75 Ig ЭИД

50/0,2 мл) холодоадаптированный (разность титров при 32 и 25 С) — 4,5 lg ЭИД

50/0,2 мл) рекомбинант А(Закарпатье)

354/89/6Р унаследовал 5 ts — мутаций в генах 1, 2, 5, 7, 8 от донора аттенуации> которые обеспечивают высокую степень ареактогенности и, генетической стабильности, Таким образом, представленный рекомбинант характеризуется сочетанием полезных признаков родительских вирусов, необходимых вакцинному штамму — анти- .20 генной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А(Закарпатье) 354/89 (НЗМ2) и температурочувствительностью и холодоадаптированностью, коррелирующей с аттенуацией для челове- 25 ка, характерных для донора аттенуации.

Морфология штамма А(Закарпатье)

354/89/6Р (НЗК2) - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика вакционного штамма

А(Закарпатье) 354/89/6Р (НЗЙ2).

Состав генома; гены 4 и 6 от эпидемического вируса, гены 1, 2, 3, 5, 7, 8 — от донора аттенуации. Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эм- 35 брионах 8,0 Ig ЭИД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 32 — 34 С. Гемагглютинириующая активность 1:256. РСТло — признак — 7,75 Ig ЭИД

50/0,2 лл. Проявляет стабильность биологических признаков после 5-кратного пасси- 40 рован ия в развивающихся куринhx эмбрионах. Обладает ареактогенностью и выраженной иммуногенной активностью, Испытания проводили в соответствии с требованиями МРТУ-42 N. 373-70 на живую 45 интраназальную гриппозную вакцину для детей 3 — 14 лет. Вакцину вводили интраназально серонегативным детям. При отборе контингенов вакцинации наблюдении за привитыми руководствовались Приказом

МЗ СССР М 1092 от 23 октября 1981 r.

Пример; группе из 101 серонегативнын ребенка 3 — 14 лет был интраназально введец вакцинный штамм А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2). После первой вакцинации у всех привитых детей, ответивших температурной реакцией в послевакцинальном периоде, лихорадка не превышала 37,5 C, появлялась преимущественно на второй или третий день после введения препарата и сохранялась, как правило, «е более суток и лишь в единичных случаях .— до 2 суток.

Среди детей контрольной группы (получивших плацебо) также имели место субфибрильные температурные реакции, На повторное введение вакцины с интервалом в 3 недели также ни в одном случае не зарегистрировано развития сильных или средних температурных реакций ни среди серонегативных детей, ни среди привитых (табл, 1). Таким образом, клиническое наблюдение за детьми, получившими препа-. рат, показало ареактогенность вакцины.

По данным РТГА достоверная сероконверсия была зарегистрирована у 70,3% лиц (табл. 2), Представленные в таблицах данные испытания реактогенных и иммуногенных свойств заявляемого рекомбинантного штамма А(Закарпатье) 354/89/6Р (H3N2) свидетельствуют о том, что штамм полностью соответствует требованиям М РТУ-42

N. 373-70 на живую гриппозную вакцину для детей 3 — 14 лет и ложет быть использован для производства этого препарата.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А (НЗИЯ) ГКВ

2265 для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для детей.

1838404

Таблица 2

Иммуногенная активность вакцинного штамма А(Закар патье/354/89/6Р (H3N2) Составитель М. Гущина

Техред М. Моргентал Корректор И. Шулла

Редактор

Производственно-издательский комбинат."Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2905 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5