Средство, проявляющее антиоксидантную активность

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии нарушений вследствие активаций процессов перекисного окисления липйдов. Цель изобретения - повышение эффективности терапии. Для этЬго в организм вводят гонадотропин хорионический в качестве средства, проявляющего антйоксидантную активность. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„59„„1821219 А1 (51)5 . А 61 К 3?/38

ГОСУДАРСТВЕННОЕ . ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГО СП А ТЕ НТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 .. .... 2 (21) 4827934/14 . (54) СРЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ АНТИОК(22) 11.03.90 . . СИДАЙТНУЮ АКТИВ ЙОЛЬ (46) 15,06.93, Бюл. M 22 ..: {57) Изобретение относится к медицине, а (71) Нижегородский медицинский институт: именно к фармакотерапии. нарушений им.:С,M.Kèpottà: .. вследствие активации процессов. перекис(72) И,М.Солопаева, K.Í.Kàíòoðùèêoâà и . ного окисления липидов, Цель изобретения

3.Г.Лобко ...— повыШение эффективности терапии. Для (56) Машковский M.Ä.Ëåêàðñòâåííûe сред-. этого в организм вводят гонадотройин.хори-: . ства. Пособие по фармакотерапии для врз-: . онический в качестве средства, проявляючей, IVI... Медицина, 1987, изд,Х, т,2, с.37 — 39; щего антиоксидантную активность. 3 табл, Изобретенйе отйосится к медицине и: Сущность предлагаемого средства забиологии и касается применения хорйойи- ключается в прйменении гонадотропина хоческого гонадотропина в качестве средства: рионического для нормализации для нормализации перекисного окисления актйвностиПОЛ. Гормон применялся следу- 3 липидов (ПОЛ). Об активности ПОЛ судили ющим образом. по количеству первичных продуктов — дие-., 5.самцов белых беспородных крыс, полновых конъюгатов в ткани печени и сердца. учающих CO4:в количестве 20-ти инъекций

Цельизобретения заключается в,следу-.- и 5 самцов белых беспородных крыс, пол-, ющем: 1. Стойкость эффекта нормализаций: учавших СС14.в.течение 5-ти месяцев, через

ПОЛ, т,к, имеющийся в арсейале средств, день после отмены CCI4 пОлучали гонадотснижающих ПОЛ, практически только один.: ропин хорионический под кожу 1 раз в день препарат — альфа-токоферол,: не дает стой- вдозе от ?5ЕДдо 85 ЕД на 100,0 массы тела кого эффекта нормализации ПОЛ; 2, предла- . животного в 1,2,3;9, 10, 11 дни после начала гается использовать вкачестве средствадля - лечения. 1Ф крыд, получавшйх 20 инъекций нормализации ПОЛ лечебный препарат, - 3.. СС14 и 6 крыс; получавших CCI4 в течение отсутствие осложнений при.примененйи го- 5-ти месяцеапослеотмены СС!4 не лечились .надотропина хорионического в качестве. йслужилйнелеченымконтролем;В качестве средства для.йормализации ПОЛ;4.йроото- : интактного контроля использовали 20 сам-:... C та и доступность проведения курса лечения . цов белых беспородных крыс такого же возгонадотропином хорионическим, в том чис- раста; как и .животные, получившие CCI4 и, ле и амбулаторно,: го.рмо н.

Укаэанная цель достигается примене- Для нормализацйи 11ОЛ крысам через нием отечественного коммерческого препа- день после окончания введения CCI4 как в рата хорионического гонадотропина — - . Количестве 20-ти инъекций, так и в течение гонадотропина хорионичекского. 5-ти месяцев в виде 657 раствора в расти тельйом масле s количестве 0,3 мл под кожу

3 1821219 4 по 4 раза в неделю, вводят гонадотропин тельном масле, количество диеновых коньхорионический двумя курсами по 3 инъек- . югатов в печени снижается достоверно:(Р .ции один раэ вдень под кожу в1,2. 3,9, 10 меньше 0,01) до 227,0+7,8 в сравнении с и 11 сутки после начала его применения в содержанием диеновых конъюгатав в печедозе от 75 ЕД до 85 ЕД на 100,0 массы тела, 5 ни нелеченых животных (451,8+72,0), без

Указанная доза гормона выбрана пото- достоверной разницы (Р больше 0,9) в cpasму, что она оказывает биологическое дейст- нении с интактными животными вие на организм. Курс в 3 инъекции был 231;5 37,0, табл,1. Через 10 дней после навыбран потому, что через 48 часов после. чала лечения гормонам количество диенодвух инъекций гормона было установлено "О вых конъюгатов в.печени крыс, получавших достоверно по сравнению с контролем сни- -СС!4 в количестве 20 ийъекций, была равно жение дионовых конъюгатов в тканях, а 282,1 13,7; при P больше 0,3 в сравнении с третья инъекция была выполнена для за- нормой (231,5 37,0), крепления эффекта двух первых инъекций, .. У животных, получавших СС4 в течение

5-ти дневный перерыв между курсами вве- "5 5 мыс, в печени через 45 сут после начала дений препарата делали для того, чтобы введения гормона количество диеновых дать организму передышку от действия гор- конъюгатов -составило 508,5+.82-,2 при P мона. Повторно 3-х дневный курс введения меньше 0,01 в сравнении с нелечеными.жипрепарата делали для того, чтобы закрепить ватными — 846,0 89,4 при Р больше О;5 в. эффект действия первого курса. 20 сравнении содержанием диеновых конъюЧерез 2 и 10 суток у крыс, получавших гатов в печени животных одновозрастного

20 инъекций четырххлористого углерода, интактного контроля — 453,0+32,5 òàáë,2. после начала введения гормона брали На Укрыс,получавшихСС14указаннымкурисследование ткань печени, У крыс. пол- . сом в течение 5 мес, в сердце количество учивших четыреххларистый углерод в тече-:25 диенавых конъюгатов достоверно (Р меньние 5 мес. Брали для исследования ткань,. ше 0,01) увеличилось(636,5+116,5) йо сравпечени и сердца через 45 сут после начала " нению с нормой(278,6+28,98). Через 45 сут введения гормона, В соответствующие cpo после начала введения гонадотропина хори-.ки брали ткань печени и сердца на исследо онического количество диенавых койьюгавание у контрольных нелеченых животнI х 30 тов оказалось нормальйым (355,9 28,3) при а также у животных адйовозрастного кант, р меньше 0 05 в сравнении с нелечеными

Роля.... "; Животными и при Р больше 0,05 в сравнении диеновыеконъюгатыопределялибя,ме с ийтактными одновозрастными животнытоду ИД,Стальной следуюшим образом ми, табл.3.

Навеску ткани замораживали в жидком 35 Пример 1. Крыса ¹ 80 получала под азоте и тщательно размельчали в охлажден- кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора ной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г nApom- СС!4 в растительном. масле по 4 инъекции в ка ткани печени и сердца растирали с 2,7.мл . неделю, Через день после отмены СО4 крыэкстрагирующей смеси гептана с изопропи са ¹ 80 получала 2 дня подряд по 1 инъек-ловым спиртом в объемном отношении 1:" 40 ции в дейь гонадотропин хорионический в .

Полученную суспенэию йомещали в поли- .. доэе 75 Ед на 100,0 массы тела, Через 48 ч этиленовые пробирки,:плотно закрывали после начала введения гормона и через 72 пробками, Пробы центрифугиравали 1О мин часа после отмены CCf4 у крысы ¹ 80 брали при 4000 g, Надосадачную фракцию nep«o на исследованйе ткань печени и определяли сили в градуированные пробирки и добавля- 45 в ней количество диеновых конъюгатов слели 1/10 объема дистиллированной воды,::дующим образом; навеску ткани заморажиПоследвукратноговстряхиванияирасслаи- вали в жидком .азоте и тщательно вания фаз отсасывали 0,5 мл гептановой размельчали в охлажденной фарфоровой фазы, К равным объемам по 0,5 мл добавля ступке. Затем 0,3 г порошка ткани печени ли этиловый спирт в объемном отношении 50 растирали с 2,7 мл экстрагирующей смеси . 1:5. Оптическую плотность проб измеряли гептана.c изопропиловьгм спиртом в объемна спектрофатометре СФ-26 при 233 нм в ном отношении 1;1, Полученную суспенэию кварцевых кюветах. помещали в полиэтиленовые пробирки, Содержание диеновых канъюгатов в плотйо закрывали пробками. Пробу цент. праберассчитывалисучетом каэффициейта 55 рифугиравали 10 мин при 4000 g. Надоса5 -I -1 экстинции, равною 2,2 10 см M дачную фракцию переноСили в

Под влиянием гонадотропина хориони- градуированные пробирки и добавляли ческого через 48 ч после начала введения 1/10объемадистиллированнойводы,После ега животным, получившим 20 инъекций двукратного встряхивайия и расслаивания

CCIn по О 3 мл 65"-./ раствора ГГ .1 в расти1821219 фаз отсасывали 0,5 мл гептановой фазы. К ткани печени растирали с 2,7 мл зкстрагируравным объемам по 0,5 мл добавляли этила- ющей смеси гептана с изопропиловым спирвый спирт в объемном отношении 1:5. Опти- том в объемном отношении 1,:1. Полученную ческую плотность пробы измеряли на суспензию помещали в полиэтиленовые спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в квар- 5 пробирки, плотно закрывали пробкой. Процевых кюветах. Содержание диеновых бу центрифугировали 10 мин при 4000 g на коньюгатов рассчитывали с учетом коэффи- центрифуге, Надосадочную фракцию перециента экстинкции. равного 2,210 см1 носили в градуированные пробирки и доМ . бавляли.1/10 объема дистиллированной

Через 48 ч после введения двух ийьек- "0 воды. После двукратного встряхивания и ций гормона в ткани печени крысы № 80 расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептаноколичество диеновых коньюгатов оказалось вой фазы.

Ф равным 208;8 нмоль/мг.. -,: . К равным объемам по 0,5 мл добавляли

Пример 2, Крыса ¹ 72 получала под: этиловый спирт в объемном отношении 1;5, кожу 20 инъекций по 0,3 мл 65% раствора 15 Оптическую плотность пробы:измеряли на

CCI4 в растительном масле по 4 иньекции s " спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в кварнеделю. Через 72 часапосле отмены СС14 у .:.- цевцх.кюветах. Содержание диеновых конькрысы ¹ 72 .забирали для исследования югатов в:пробе рассчитывали с учетом . ткань йечени, в которой определяли количе - ." коэффициента экстинкции, равного 2,2 10 ство диеновых коньюгатов следующим об- 20 см, M разом; навеску ткани замораживали в: . Через 45 сут после начала лечения в жидком азоте и тщательно размельчали.в: печени крыСы ¹ 106 диеновые коньюгаты охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 оказались в количестве 236,1 нмоль/мг, r порошка ткани йечени растирали с 2.,7 мл: . П р и м:е р 4. Крыса й, 126 получала по экстрагирующей смеси гептана.с-изопропи- .25 0,3 мл 65% раствора CC|4 в растительном ловым спиртом в объемном отношении 1:1.,: масле в теченйе 5 мес. Через день после

Полученную суспензию помещали в поли- отмены СС4, крысе № 126 вводили под кожу этиленовые пробирки. плотно закрывали flo одному разу в дейь гонадотропин хорио- пробкой, Пробу центрифугировали 10 мин, нический в дозе 85 ЕД на 100,0 массы тела при 4000 g на центрифуге, Надосадочную 30 в 1, 2, 3, 9;1„11 дни после начала лечения. .фракцию переносили в градуированйые Через 45 сут после начала. примейения горпробирки и добавляли 1/10 объема дистил- .:., мона у крысМ № 126 брали печень на исслелированной воды. Последвукратноговстря- дование и определяли в ней количество хивания и расслоения.фаз отсасывали 0;5 мл диеновых коньюгатов следующим образом: гептановой фазы, К равным обьемам по 0,5. 35 навеску ткани змараживали в )кидком азоте мл добавляли этиловый спирт в обьемном . и тщательйо размельчалй в охлажденной отношении 1;5. Оптическую плотность про- . фарфоровой ступке. Затем 0,3 г. порошка бы измеряли на спектрофотометре. СФ-26: -: ткани печени растирали с 2,7 мл экстрагирупри 233. нм в кварцевых кюветах; Содержа-:ющей смеси гептайасизопропиловымспирние диеновых конъюгатов рассчитывали с 400 том"вобъемном:отношейии1:1. Полученную учетом коэффициента экстинкции, равного. суспензию .помещали в .полиэтиленовые

2, 2 10 см М,: .—: .. пробирки, плотно закрывали пробкой. ПроЧерез 72 часа после отмены CCt4 s тка-: бу цейтрифугировали 10 мин при 4000 g на ни печени крысы ¹ 72 количество диеновых центрифуге. Надосадочную фракцию переконьюгатов оказалось -равным 998,8 45 носили в градуированнйе пробирки и донмоль/мг. ., . бавляли 1/10 объема дистиллированной

Пример 3. Крыса ¹ 106 получала20. воды, После двукратного встряхивания и инъекций по 0,3 мл 65% раствора СС14 в : расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептанорастительном масле 4 раза в неделю. Через вой фазы. К равным объемам по 0,5 мл додень после отмены.СС!4 эта крыса получила 50 бавляли этиловый спирт в объемном гонадотропинхорйонический под кожув до- . отйошении.1 .5. Ойтическую плотность прозе 75 ЕД íà 100,0 массы тела один раз в день бй измеряли:на спектрофотометре СФ-26 в 1, 2, 3 и 9 сутки после начала лечения. при 233 нм.в кварцевых кюветах. СодержаЧерез 10 суто . после начала введения гор-. ние диеновых конъюгатов.в:пробе рассчитымона у крыс К. 106 брали на исследование 55 вали. с учетом коэффициента экстинкции, ткань печени и определяли в ней количество равного 2;2 ° 10. см М диеновых коньюгатов следующим образом: Через45сутпосле начала введения горнавеску ткани замораживали в жидком азо- мона .количество диеновых конъюгатов в те и тщательно размельчали в охлажденной ткани печени крысы № 126 равнялось 326,8 фарфоровой ступке. Зэтем 0,3 г порошка нмоль/мг.

1821219

Пример 5, Крь1са № 46 получала 0,3 мл 65% раствора СС!4 в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 дней после отмены СС14 у крысы ¹ 46 взяли ткань печени нэ исслеДование диЕ lOBblX КОньЮгатОв следующим образом; нэвеску ткани зэморэ живали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой . ступке. Затем 0,3 r порошка ткани печени растирали с 2,7 мл экстрэгирующей смеси гептэна с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1;1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно закрывали пробкой. Пробу центрифугировали 10 мин при 4000 g. на центрифуге. Нэдбсэдочную фракцию переносили в грэнулированные пробирки и добавляли

1/10 объема дистиллированной воды..После двукрэтного встряхивания и расслоения фэз Отсэсывэли 0,5 MJ1 гептэ новой фэзы, К равным обьемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в обьемном отношенли 1:5. Оптическую плотность пробь1 измеряли нэ спектрофотометре СФ-26 при 233 нм в кварцевых кюветах. Содержание диеновых коньюгатов в пробе рассчитывали с учетом

5 коэффициента. экстинции равного 2,2 ° 10

CM-1 M-1

Через 45 дней после отмены CCI4 у крысы 1 1 46 в печени диеновые конь1огэты были в количестве 1089,6 н мол ь/м г, Пример б. Крыса ¹ 127 получала 0,3 . мл 65% раствора CCI4 в растительном мэсле в течение 5-ти месяцев. Через день после отмены CCI4 крыса N 127 получала гонэдотропин хорионический в дозе 85 ЕД нэ 100,0 массы тела в 1,2, 3, 9, 10, 11 дни после начала лечения. Через 45 суток после начала применения гормона у крысы ¹ 127 брали сердце нэ исследование диеновых коньюгатов следующим образом; навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в. охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г порошкэ печени растирали с 2,7 мл экстрагирующей смеси гептана с изопропиловым спиртом в объемном отношении 1:1, Полученну о суспензию помещэли в полиэтиленовые пробирки; плотно закрывали пробкой, Пробу центрифугировэли

10 мин при 4000 g нэ центрифуге, Надосэдочную фракци1о переносили в градуированные пробир <:i и. добавляли 1/10 объема дистиллировэнной воды. После двукратного встряхивания и расслоения фаз отсасывали 0,5 мл гептэновой фазы. V. равным обьемэм по

5 0,5 мл добавляли этиловый спирт в обьемном отношении 1:5, Оптическую плотность пробы измеряли на спектрофотометре СФ26 при 233 нм в кварцевых кюветах, Содержэние диеновых коньюгэтов в пробе

10 рассчитывали с учетом коэффициента экстинции равного 2,2 10 см M ".

Через 45 сут после начала введения гормона количество диеновых коньюгатов в ткани сердца крысы ¹ 127 составляло

15 299,64 нмоль/мг.

Пример 7. Крыса N 47 получала 0,3 мл 65% раствора ССИ в растительном масле в течение 5 мес. Через 45 сут после отмены СС14 у крысы N. 47 брэли сердце для

20 исследований в нем количества диеновых коньюгэтов следующим образом; навеску ткани замораживали в жидком азоте и тщательно размельчали в охлажденной фарфоровой ступке. Затем 0,3 г. порошка ткани

25 печени растирали с 2,7 мл экстрэгирующей смеси гептанэ с изопропиловым спиртом в обьемном отношении 1:1. Полученную суспензию помещали в полиэтиленовые пробирки, плотно зэкрывэли пробкой. Пробу

30 центрифугировали 10 мин при 4000 g на центрифуге, Надосэдочную фракцию переносили в градуированные пробирки и до-. бавляли 1/10 обьемэ дистиллировэнной водь1. После двукратного встряхивания и

35 расслоения фаз отсасывэлл,0,5 мл гептэно-. вой фазы. К равным объемам по 0,5 мл добавляли этиловый спирт в объемном . отношении 1:5. Оптическую плотность пробь1 измеряли нэ спектрофотометре СФ-26

40 при 233.нм в кварцевых кюветах. Содержание диеновых коньюгэтов рассчитывали с учетом коэффициента экстинции, равного

2,2 10 см ЬГ, Через 45 сут после отмены CCI4 у кры45 сы № 47 в ткани сердца было 1021,5 нмоль/мг диеновых коньюгэтов, Формула изобретения

Применение гонэдотропина хорионического в качестве средства, проявляющего

50 антиоксидэнтную активность.

9 1821219 10

Таблица

Количество диеновых коньюгатов (Д. I .. ) в ткани печени, крыс, получавших.

CC1ty в количестве 20-ти инъекций (нмоль/мг) . Группы животных

Сроки исследованил

I I

2 сутки

В крыс

Д.К.

Р" крыс Д.К., 998,80

63

66

451,85+72 04

245 16

236 08

If+m

236,08

240,63

107

236, 08 108 295, 10

208,84 1.09 272,40

208,84 88 е

227,0 О+7 79 89

90 317 80

»»»m» е» ыйе»» ю е

2823 13+13,Ф 73

° »»» ° »ее е °

23 1,54+36,98

Р между 1 и 2 группами меньше 0,01

P между 2 и 3 группами больше 0,9

P между 1 и 3 группами меньше 0,02 на 2-е сутки

»»»ю» Ф ° » е

P между 3 и 2 группой на 10 сутки больше 0,3

Крысы, получавшие СС1ц (нелеченые) Крысб! полу чавшие ХГ после отме" ны СС1!1

HHTB KTHble Кры сц (одновоз растные) 308,72

431,30

376,82

590,20

431, 30

276,94

326,96

399,52 .

376,82

454,00

68 190,68

69, 299,64

70 167,98

71 267,86

10 сутки е»

326,88

286,02

1821219

Таблица 2

»»» «»»»

Исследование через.45 5.суток .после начала введения ХГ .

»»О»ФФ»»»»»»»

Ф" крыс Д.К.

»»»»»»»»»»»»»»»»»

»» «»»»»»»»

Группы животных

»

Крысы, получившие CC1j (нелеченые) 880, 76

1089,60

585,66

78;, 6

898,Ы

830,82

47

48

r0

51 2+m 845, 95+»89, 35

526., 6-4

544,80

326,80

127. . .: : 435,84

128 . 710,24

»е»»» °

Z+m 508, 86 46, 78

381,36

581, 16

131; .: 337 04

132: ..... . 454,00

133:, .. 508, 48

134: . :: 472 16

135: -, . . .435,84

136 : . ::, . 454,00

«» Ф»»

L+m 453,0.0+32,46

»»»»»»»»» н и е. Р между .l и 2 группами < 0,02;

P между 2 и 3 группами ) 0,5;

P между 1 и 3 группаии < 0,01 .4

Крысы, получив- 123

125 огмены CC1q

126 в . j, Интактные крь1сы . 129 (одновоз ра ст ные}

Примеч а

Количество диеновых конъюгвтов (P,.K.) в ткани печени крыс, .покрученных СС1Н в течение 5-ти месяцев . (нмоль/мг) 1821219

Т а бл и ц а 3

Количество диеновых конъюгатов (Д.K. ) в ткани сердца крыс, получавыих СС1ц в течение пяти месяцев (н мол ь/мг) ° а» еа ю ю аа ю

Исследование через 45 сут после начала вве" дения ХГ а» ° юю ююююа»О \ ае ююю, »юаа юЮ»»ю ю юююю»Е

1Ж крыс Д.К. юю ю ° »аа а» юю

47 .. 1021 50

48 . 481 24

490,:32

481.,24

708,24 е « юе аееаююа»юю

Ntn 636,51+116,00

123: . - 37228

124 . —:- 4 1-,30

126 .. 372,28

127 - 299,64

128 . . . : . 304,18 ю ю w ю а» ю ае а» ю аа е

М+.в . 355,94+28,25

272,4

317,8

263,3.4 . . 28 1, 48

5...: 167.,98

6 .; ....... 304,1.8

7 : .; 385,90

8; -.:. 236,.08 еюеа юаееаюа»аеюw

Y+e 278,64+28,98

Гру вот ппы жиных

Крысы, полу :чавшие СС1 (нелеченые) 50

51

Крысы, полу-" чившие ХГ после отмены

СС1Ч

Интактнце крысы 1 (одновозРвстные)

П р и м е ч а н и е. P между 1 и 2 группами < 0,.05

P между 2 и 3 группами >0,05

Р между 1, и 3 группами <0,.02 еююаеЕ юеаееа ю а а WюююеаЕ аеюаеююююю ююеа ю

Редактор

Составитель И.Солопаева

Техред М;Моргентал: . Корректор Е.Папп

Производственно-издательский комбинат-"Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2079 Тираж ..: .: . Подписйое

ВНИИПИ Государственного комитета поизобретениям и открытиям:при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., 4/5